植物细胞骨架的观察_观察植物细胞

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实验六 植物细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮兰R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。

三、实验试剂：

1、M-缓冲液；

2、pH6.8磷酸缓冲液；

3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；

4、0.2%考马斯亮兰R250；

5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液；

四、实验步骤：

1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；

2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20min；

3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min；

4、3%戊二醛固定30min；

5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min；

6、0.2%考马斯亮兰R250染色20min；

7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。

五、实验作业：

1、绘制你所观察到的植物细胞骨架图象；

2、戊二醛、考马斯亮兰R250、TritonX-100是什么？在本实验中各起什么作用？