真菌的分子鉴定_真菌分子鉴定技术
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真菌的分子鉴定
内生真菌(Endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某一段时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的真菌，真菌的分子鉴定。近年来的研究表明，内生真菌可以产生与宿主相同或相似的代谢产物，对相应的内生真菌及其代谢产物的研究已经成为寻找药物来源的一种新途经。本文以我国特有药用植物——喜树(CamptothecaacuminataDecne.)为实验材料，对喜树内生真菌的组织分布及分离方法进行初步研究。实验结果表明，内生真菌分离的表面消毒以75%酒精和0.1%升汞结合的方法较好。对喜树的根部和茎部的升汞消毒时间以4～5min为宜，喜树叶子的升汞消毒时间应控制在2min左右。在所试条件下共计分离得到70株内生真菌，主要分布在树叶(42.9%)和皮部(35.7%)，根部(14.3%)和种子(7.1%)中的内生真菌数目较少，在木质部未分离到内生真菌。采用形态学和分子生物学结合的方法对所得菌株进行鉴定。应用形态学方法共鉴定出6株内生真菌，分布于6属。按照培养特征，把所得内生真菌归为27个形态类群。选取不同形态类群中的代表菌株，扩增并测定其rDNAITS区段的DNA序列，结合内生真菌与GenBank中参考菌株碱基序列相似性和系统发育关系分析，确定其分类地位，鉴定材料《真菌的分子鉴定》。共获得18株内生真菌的ITS序列，分析结果表明，这18株内生真菌分属于2个亚门，4纲，8目，8科，14属;形态学鉴定与分子生物学鉴定结果一致。鉴定结果在一定程度上反应了喜树生态系内生真菌的生物多样性。在本研究中，共分离得到18株拟茎点霉属(phomopsis)菌株，占25.7%，为优势菌群，对其进行了基于ITS区段的系统发育分析。本文采用薄层层析TLC方法与高效液相色谱HpLC法，从3株内生真菌CZ-
14、CZ-
17、CZ-18的发酵产物中检出喜树碱，含量为0.03-0.04mg/g。发酵产物是以喜树种子煎汁液体培养基培养。
内生真菌(Endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某一段时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。近年来的研究表明，内生真菌可以产生与宿主相同或相似的代谢产物，对相应的内生真菌及其代谢产物的研究已经成为寻找药物来源的一种新途经。本文以我国特有药用植物——喜树(CamptothecaacuminataDecne.)为实验材料，对喜树内生真菌的组织分布及分离方法进行初步研究。实验结果表明，内生真菌分离的表面消毒以75%酒精和0.1%升汞结合的方法较好。对喜树的根部和茎部的升汞消毒时间以4～5min为宜，喜树叶子的升汞消毒时间应控制在2min左右。在所试条件下共计分离得到70株内生真菌，主要分布在树叶(42.9%)和皮部(35.7%)，根部(14.3%)和种子(7.1%)中的内生真菌数目较少，在木质部未分离到内生真菌。采用形态学和分子生物学结合的方法对所得菌株进行鉴定。应用形态学方法共鉴定出6株内生真菌，分布于6属。按照培养特征，把所得内生真菌归为27个形态类群。选取不同形态类群中的代表菌株，扩增并测定其rDNAITS区段的DNA序列，结合内生真菌与GenBank中参考菌株碱基序列相似性和系统发育关系分析，确定其分类地位。共获得18株内生真菌的ITS序列，分析结果表明，这18株内生真菌分属于2个亚门，4纲，8目，8科，14属;形态学鉴定与分子生物学鉴定结果一致。鉴定结果在一定程度上反应了喜树生态系内生真菌的生物多样性。在本研究中，共分离得到18株拟茎点霉属(phomopsis)菌株，占25.7%，为优势菌群，对其进行了基于ITS区段的系统发育分析。本文采用薄层层析TLC方法与高效液相色谱HpLC法，从3株内生真菌CZ-
14、CZ-
17、CZ-18的发酵产物中检出喜树碱，含量为0.03-0.04mg/g。发酵产物是以喜树种子煎汁液体培养基培养。
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