食品安全检测技术_食品安全及其检测技术

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食品危害因子类型：1生物危害：细菌、寄生虫、病毒；2化学危害：天然毒素、添加剂、农兽药、化肥、清洗消毒剂；3物理危害：头发、昆虫、玻璃、金属、辐照技术。食品安全检测技术的基本原则：质量、安全、快速、快速、可操作、经济

检验中的计量器具必须按国家规定及规程计量和校正。气相色谱原理：利用试样中各组分在气相和固定气液-固液相间的分配系数不同，当气化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组分就在其中的两相间进行时，组分就在其中的两相间进行反复多次分配，经过一定的主场后便彼此分离按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描述出各组分的色谱峰。检测器：氢火焰离子化验检测器（FID）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、氮磷检测器（NPD）等。

液相色谱原理：是由流动相将被分离的混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子的差异进行分离。常用仪器：紫外检测器、视察折光检测器、荧光检测器、光电二极管阵列检测器。

残留物质：在食品原料的生产过程中，由于各种原因而引起食品原料中对消费者健康存在安全性问题的有害化学物质，例如农药残留、兽药残留、化肥残留、饲料添加剂。

残留物质的分析方法：仪器分析（GC、LC、HPLC、LC-MS、GC-MS）；生物化学方法（微生物法、酶法、免疫学法）；生物传感器(酶传感器、免疫传感器、微生物传感器)；生物芯片法；分子印迹合成受体技术。

农药残留：指农药残留使用后，残存在生物体、农副产品和环境中微量农药原体、有毒代谢产物、降解物和杂质的总称。

目前我国农药残留最突出的是蔬菜中的农药残留

化肥污染的主要问题主要是食品中的硝酸盐污染和重金属污染。

农药按其作用分类：杀虫剂，杀菌剂，除草剂，植物生长调节剂。按加工剂类型分为：粉剂，可湿性粉剂，可溶性粉剂，乳油，颗粒剂，水剂，胶悬剂。使用较多的农药：有机磷类，氨基甲酸酯类，拟除虫菊酯类。

有机氯农药残留的定性方法：焰色法（无色火焰中呈绿色），亚铁氢化银试纸法（蓝色）

气相色谱法测有机氯农药残留：操作步骤：石油醚提取，浓硫酸净化，测定，计算。检测器：Ni63电子捕获检测器。

有机磷农药残留的定性方法：刚果红法（蓝色），纸上斑点法原理

气相色谱法分析有机磷农药常用：火焰光度检测器或氮磷检测器。

农药残留分光光度计法测有机磷和氨基甲酸酯农药的原理：有机磷和氨基甲酸酯农药是乙酰胆碱酶和羧酸酯酶的抑制剂，在试验条件下，它们可以降低乙酰胆碱酶和羧酸酶催化乙酰胆碱或羧酸脂的水解速度，所以实验体系中存在的乙酰胆碱或羧酸脂的量越多，表示酶抑制剂存在量越多，即有机磷或氨基甲酸脂农药越多，分析乙酰胆碱的残留量时可以利用乙酰胆碱与羟胺、列离子形成有色络合物而进行分光光度分析。三氯化铁-盐酸溶液：出去蛋白质，排除沉淀干扰。

盐酸萘乙二胺法测硝酸盐和亚硝酸盐中蛋白质沉淀剂：饱和硼砂溶液，亚铁氰化钾，乙酸锌。

兽药：狭义是指用于预防和治疗畜禽疾病的药物。

兽药残留：是指动物性产品的任何可食部分含有的兽药母化合物或其代谢物的总称。兽药残留的种类：抗生素类，磺胺类，硝基呋喃类，抗寄生虫类，激素类药物。

抗生素：指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的一致或杀灭作用。广义抗生素包括抗微生物的抗生素(抗细菌、抗真菌、抗立克次体、抗衣原体和抗病毒等)和抗肿瘤抗生素。常用的抗生素主要是指抗微生物感染的抗生素。

对动物性食品中的抗生素，驱虫剂等的分析和检测一般采用HPLC法

激素：是机体某些组织分泌的特殊有机物质，能够活化或抑制不同的组织细胞，调节机体的各种代谢活动。

在畜牧业中激素的作用：防治疾病，调整繁殖和较快生长发育速度。

气相色谱标定法测定白酒中甲醇及杂醇油所用的内标物为乙酸乙酯，检测器为FID氢火焰检测器，流动相为N2，食品中吊白块的测定原理及所用试剂：在酸性条件下样品进行蒸馏，流出物用水吸收，吸收液中甲醛与乙酰丙酮及铵离子反应，生成黄色物质，与标准系列比较定量，在另一酸性条件下对样品进行蒸馏，流出物用20%乙酸铅吸收，吸收液酸化后用碘标准液滴定，测定SO2量。操作步骤：标准曲线纸杯，样品处理，显色操作。食品中糖精钠薄层层析法测定的原理：在酸性条件下，食品中糖精钠用乙醚提取，浓缩，薄层色谱分离，显色后于标准比较，进行定性和半定量测定。操作步骤：样品提取，薄层板制备，点样，展开与显色，计算。试剂的作用：1无水NA2SO4：乙醚层脱水，2无水乙醇:溶解残留物。

食用合成色素纸层析测定中，在吸附过程中用聚苯酰胺吸附色素，在解析过程中用碱液解析色素。

常见到产毒真菌多为曲霉菌属，青霉菌属，镰刀菌属。食品中常见到 霉菌毒素有：黄曲霉毒素、赤者曲霉毒素杂色去霉毒素、黄天精、环氯素、展青霉素。

霉菌毒素通常也成为真菌毒素，是霉菌产生的具有生物毒性的次级代谢产物

黄曲霉毒素（AFT）,其中的B1，M1是强致癌物，因为B1

毒性和致癌性最强，且又是食品中污染的主要形式，故作为污染指标，AFT难溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮、氯仿等有机溶剂，在紫外线下，B1、B2发蓝紫色荧光，C1、C2发蓝绿色荧光，共有12种 黄曲霉毒素的检测方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、荧光光度法、微柱筛选法。

黄曲霉毒素薄层层析法检测的原理：样品中的黄曲霉毒素B1，经有机溶剂提取、净化、浓缩、薄层分析后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量赖测定黄曲霉毒素B1的含量。

免疫分析：IA,是基于抗原抗体特异性识别和可逆性结合反应为基础的分析方法。通过对半抗原或抗体进行标记，利用标记物的生物或物理或化学放大作用，对样品中特定的残留物进行定性定量检测

酶联免疫：ELISA，是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合建立的一种免疫分析方法。原理：ELISA是在免疫酶技术上发展起来的一种新型免疫测定技术，ELISA过程包括：抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成抗原-待测抗体-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。同理也可包被抗体，测定抗原含量。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。ELISA常用的四种类型：直接法测定抗原，间接法测定抗体，双抗体夹心法测定抗原，竞争法测定抗原。

抗体：是机体在抗原刺激下所产生的特异性球蛋白，是免疫分析的核心试剂。

亲和层析：是根据流动相中的生物大分子与固相表面偶联的特异性配基发生亲和作用，双方专一的结合成复合物，然后利用亲和吸附剂的可逆性质，通过特定的洗脱机洗脱，可以达到分离，纯化与固定相有特异亲和能力的某种物质，这种利用生物分子间亲和吸附和解离的层析方法称为亲和层析法。

亲和层析四步操作：偶联、吸附、清洗、洗脱

亲和层析常用的载体：纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、聚乙烯凝胶。

人体内矿物质三大类：常量元素、微量元素、有毒元素。限量元素：微量元素和有毒元素的合称。

比重d>5的金属称为重金属。国标中测Pb的方法有：1石墨炉院子吸收光谱法；2氢化物院子荧光光谱法；3火焰原子吸收法；4二流腙比色法；5单扫描极谱法

双流腙比色法测铅试验中的掩蔽剂有盐酸羟胺，氰化钾，柠檬酸铵。

加工过程中产生的有害物质包括：N-亚硝基化合物，苯并芘，丙烯酰胺，氯丙醇

N-亚硝基化合物根据化学结构分为亚硝胺和N-亚硝酰胺。

丙烯酰胺致癌物质在动物和人体均可代谢转化为其致癌活性代谢物环氧丙酰胺。

丙烯酰胺高效液相色谱法色谱柱：反相18柱，20cm*4.6mm，5μm；流动相：V甲醇：水=95:5，流速

0.8ml/min；检测器：二极管阵列检测器。

氯丙醇气相色谱法色谱柱：不锈钢柱；检测器：火焰电离检测器；流动相：He或空气。油脂质量的检测包括：酸价，皂化价，碘值，过氧化值，氧化值。

银盐法原理：样品消化后，在酸性条件下，用氯化亚锡将五价的砷还原成三价的砷，再利用锌和酸反应产生原子态氢，将三价砷还原为砷化氢，再与二乙基二硫代氨基甲酸银作用，在有机碱存在下，生成棕红色胶态银，进行比色测定，在生成AsH3过程中，有H2S，会干扰测定，可用浸泡过的醋酸铅的棉花赖排除H2S的干扰。操作步骤：试样处理，标准曲线的绘制，样品测定，计算

食品掺假：是指向食品中非法掺入外观、物理性状或形态相似的非同种类物质或同种质量低劣物质的行为。

掺假方式：掺兑，混入，抽

取，假冒，粉饰

牛乳中掺假：1掺水：增加食品净含量，获利；感官检验，比重法，阿贝折光仪法；2掺洗衣粉：增加奶质浑浊度；荧光法；3掺碱性物质：掩蔽牛奶酸败，降低浓度；溴甲酚紫法，溴麝香草酚蓝法，玫瑰红酸定性法；4掺尿：提高蛋白质含量；尿中含肌酐，与碱性苦味酸反应呈红色或橙色；5掺尿素：提高蛋白质含量；格里斯试剂法；6掺淀粉、米汁、豆浆；增加重量、提高密度；碘-淀粉、皂素溶于热水或热酒精可与氢氧化钠反应生成黄色物质；7掺蔗糖：改善鲜奶口味；间苯二酚法；8掺单-电解质；增加比重或中和酸度；9掺防腐剂：防止酸败、延长保质期。

食用油中掺盐水，增加油的重量

酒中掺敌敌畏，有酩酊感，被误认为好酒。

辣椒粉掺红砖粉，加强色泽，增加比重。

蜂蜜掺水加重，掺糖提高甜度，掺蜜糖淀粉类增大黏度，掺食盐增加浓度黏度减小 面粉增白剂：吊白块，亚硫酸盐，过氧化苯甲酰。掺溴酸钾增筋劲和品质改良剂。乳制品中掺伪的检测

实验原理 在样品中掺一些中和剂、可溶性钡盐、豆浆、尿素、食盐、芒硝、防腐剂等杂质有害人体健康物质都可以用不同方法检测出来。实验原料：鲜牛奶

实验试剂：溴甲酚紫、玫瑰红酸钠、HCl、乙醇+乙醚

（1:1）、KOH、混合试剂、二乙酰一月亏、硝酸银、酪酸钾、20％醋酸、1％氯化钡、FeCl3溶液等

四、实验方法：

1、牛乳中掺中和剂的检测 溴甲酚紫在PH为5..2~6..8~8.0的溶液中，颜色有黄色变为紫色-至蓝色，当牛乳中掺中和剂时溶液呈天蓝色。取一支试管加入样品5ml，加入1％溴甲酚紫指

示剂3~4滴，观察并记录实验现象。

2、牛乳中掺可溶性钡盐的检验：将滤纸浸于2％玫瑰红酸钠溶液中待干燥后备用。取上述滤纸条滴一滴样品，如有钡存在显红褐色，再加入HCL（1+20）1滴即转变为鲜红色。

3、牛乳中掺豆浆的检验：豆浆中含有皂素，皂素可溶于热水火热乙醇中，并与KOH生成黄色。取待测样品20ml，放入150ml三角瓶中加入乙醇+乙醚（1：1）混合液3ml,，加25％KOH5ml摇匀，同时做空白试验，弱若样品呈微黄色表明有豆浆存在，呈暗白色则不含豆浆。

4、牛乳中掺尿素检验：取牛乳5ml于试管中加0.5ml二乙酰一月亏，3ml酸试剂，充分混匀后在沸水中准确加热一分钟（不得超过1.5min），立即放入冷水中观察，1min后呈粉红色则存在。

5、牛乳中掺食盐的检验：硝酸银和铬酸钾呈红色反应，如牛乳中的Cl-含有超过天然乳中的含量，全部生成AgCl沉淀呈现黄色反应。取5ml0.01mol/lAgNO3加入2滴10％铬酸钾溶液于试管中混匀，加待测样品1ml充分混匀，如牛乳呈黄色则说明其中的氯离子含量大于0.14％。

6、牛乳中掺芒硝的检验：钡离子与玫瑰红酸钠反应生成红色玫瑰红酸钡，如牛乳中含大量的硫酸根离子则可与钡离子生成不溶性硫酸钡，使玫瑰红酸钠的红色消失变为黄色。取样品5ml与试管中加1~2滴20％醋酸，4~5滴1％氯化钡，2滴1％玫瑰红酸钠。摇匀静置，掺芒硝呈黄色，天然乳为粉红色。

7、牛乳中掺防腐剂的检验：取牛乳1ml于试管中加入0.5ml氯化铁溶液，放入沸水中加热1min，此时牛乳凝固，有甲醛存在则出现紫色，颜色深浅与甲醛含量呈正比。

畜禽肉中四环素残留的测定 实验原理：试样经提取，微孔滤膜过滤后直接进行，用高效液相色谱分离，紫外检测器检测与标准系列比较即可得四环素含量

仪器与试剂：乙腈

0.01mol/lNaH2PO4 四环素标准液 5%高氯酸 恒温振荡器 离心机 高效液相色谱实验原料：猪肉

操作方法：色谱条件，标准曲线制作，样品测定，计算 加入5%高氯酸的作用是什么？因四环素在PH高的环境下，极易与金属离子结合，造成负面影线，加高氯酸控制酸度，达到更有效提取四环素的作用。

组胺含量的测定

实验目的：学习比色法测定组胺含量的原理和方法

实验原理：鱼肉中的组胺用正戊醇提取，与偶氮试剂反应呈橙色，与标准系列比较定量，即可求出组胺含量。

实验试剂与仪器：碳酸钠 氢氧化钠 对硝基苯胺 正丁醇 三氯乙酸 盐酸 组胺标准品 具塞锥形瓶 分液漏斗 721分光光度计

实验方法：

1、组胺标准曲线的制定

2、样品中组胺的提取：取10g左右切碎的鱼肉于具塞锥形瓶中，加入

20ml0.1/ml三氯乙酸浸泡2至3小时过滤小烧杯中，用

NaOH调PH为9--10，取1ml滤液于分液漏斗中，再加入3ml正戊醇振摇5min，重复操作3次，合并上层液于10ml容量瓶，用正戊醇提取液于分液漏斗中提取，再加入

1mol/LHCL3ml震荡5min,取下层液，重复操作3次，合并下层液于10ml容量瓶中，再用盐酸定容。

3、取1ml上述提取液于10ml离心管仲，分别加入15%碳酸钠及偶氮试剂各3ml，加入至10ml摇匀，放置10min于480nm处测吸光度

4、计算：样品中组胺含量（mg/kg）=1000*(m0/m)*V 用正戊醇提取前为什么要调PH为9~10?为什么还要用HCL提取3次？破坏组织，使组胺游离出来。加HCL提取三次是为了纯化提取的组胺。食品中着色剂含量的测定 实验原理：水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下被解吸，再用纸色谱或薄层色谱法进行分离，于标准比较定性定量，最顶检出量为5ug，点样量为1g，样品最低检出量约为50mg/kg.实验原料：果冻

仪器与试剂;聚酰胺粉 乙醇 乙醇胺溶液 PH=6的水 柠檬酸溶液 正丁醇—无水乙醇—氨水(6+2+3)着色剂混合标准液 烧杯 吸管等

实验步骤：1。样品处理 称取100g样品 加入30ml水捣碎，称取粉碎样品40g左右，温热溶解，若样品PH较高用柠檬酸溶液调至4左右。2。吸附分离：将处理后所得的溶液加热到70°C，加入1g聚酰胺粉充分摇匀，用柠檬酸溶液调PH至4，使着色剂完全被吸附，若溶液还有颜色可再加一些聚酰胺粉。将吸附着色剂的聚酰胺粉全部转入漏斗中过滤，用PH=4的70℃水反复清洗，每次20ml，边洗边搅拌。若含有天然着色剂再用甲酸甲醇溶液洗涤1-3次，每次20ml至溶液无色为止，再用70℃的水多次洗涤至流出液为中性，洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇—氨溶液分3次解吸全部着色剂，收集全部解吸液与水浴上除氨。将上述溶液至水浴锅上浓缩至2ml后转移入10ml容量瓶中，用乙醇洗涤容器，洗液转入容量瓶中并稀释至刻度10ml。3。定性 取色谱用纸，在距底边2㎝起始线上分别点3~10ul样品溶液，1~2ul着色剂标准液分别呈有正丁醇—无水乙醇—氨和正丁醇—吡啶—氨水展开剂的层析缸中，用上行洗展开，待溶剂前沿展至15㎝处，将滤液取出，于空气中晾干与标准斑比较定性，也可取样0.5ml样液在起始线上从左至右点成条状，纸的左边点着色剂标液，依次展开，晾干后定性，靛蓝在碱性条件下易褪色，可用甲乙酮—丙酮—水作展开剂。

为什么用聚酰胺吸附时要用柠檬酸将PH值调至4？在酸性条件下吸附剂聚酰胺能发会更好的作用，吸附着色剂

为什么要用70℃热水流至流出液到中性？70度的水能使实验材料保持流体状态，便于操作；流至中性是为了中和前面所加入的柠檬酸