免疫组化对照设计_免疫组化实验设计
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原则上讲,所有实验都应该设置阳性对照(用以检验染色过程成功),阴性对照(用以检验阳性结果为真阳性),空白对照(用以排除非特异背景染色)。不过,由于样本选取的复杂性,国内多数实验室以及国外多数小实验室,都无法做到规范的阴性对照,所以普遍以空白对照代替阴性对照,而这种方法也在国内外得到承认。1)空白对照:
第一抗体由PBS取代。2)严格的阴性对照: 用已知的确定不表达你所要检测的抗原的其他组织的切片做阴性对照 3)回收实验阴性对照: 已知抗原与相应的第一抗体混合,发生结合沉淀,再用此沉淀抗体复合物进行免疫组化实验,结果为阴性。
4)同型抗体替代对照: 用于第一抗体同种动物的血清或非免疫IGg代替第一抗体结果为阴性。
5)自身对照 在同一切片上,应将不同组织成分中的阴性结果与检测的目的物对照比较 不过目前绝大多数人都是用PBS来代替一抗作为阴性对照,其实质是空白对照,因为这样做如果结果是阴性,也只是排除了二抗引起的非特异而已,但至于一抗是否会产生非特异,那只通过空白对照是不得而知的。因此你就必须做严格意义上的阴性对照。
《免疫组化对照设计.docx》
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