线虫分离方法_线虫浅盘分离法步骤

线虫分离方法由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“线虫浅盘分离法步骤”。

线虫分离方法

分离线虫可采用贝尔曼漏斗法和浅盘法。

贝尔曼漏斗法：将玻璃漏斗（直径为10–15 cm）置漏斗架上，下面接一段（10 cm左右）橡皮管，橡皮管上装一个止水夹。将劈成“火柴杆”状大小的分离材料，取湿重10 g，用两层纱布包好，放入漏斗中，然后放入清水，清水以浸没分离材料为度。经过4–24 h，由于趋水性和本身的重量，线虫离开植物组织，并在水中游动，最后沉降到漏斗底部的橡皮管中。打开止水夹，取底部约5–15 ml的水样，其中含有样本中大部分活动的线虫。在解剖镜下检查，如果线虫的数量少，可以离心（1500 r/min，2–3 min）沉降后再检查。

浅盘法：浅盘分离装置主要由两只不锈钢浅盘组成，其中口径略小的一只底部为粗网筛，放在另一只浅盘上面。将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎（或钻取的木屑）置于筛盘纱布上，慢慢注入清水，使水浸没样品。分离结束后，移去筛盘，把大盘内的分离液集中于小烧杯内。小烧杯内的线虫分离液可通过自然沉降或离心机（1500 r/min，2–3 min）浓缩至适宜的量，以便镜检。

常规镜检：分别将各标号盛有线虫分离液的培养皿置于解剖镜下观察，先确认有无线虫。对有线虫的样品进行活体镜检，观察它的一般形态结构。然后选择几条成熟、特征易观察的线虫，用针或吸管移至载玻片上的水滴中。将此载玻片在酒精灯火焰上方往返几次（5–6 s）或放置于已盛满高温热水、打开盖子的保温瓶口上，蒸30–60 s至虫体死亡，加盖玻片后在显微镜下观察。根据形态特征予以初步鉴别，以确定是否需作进一步的鉴定。

快速镜检：（1）用显微镜直接观察线虫浓缩分离液。分离液经一定时间后，当漏斗下端和乳胶管内出现透明度降低甚至混浊现象、表明线虫的游离量较多时，即可用培养皿接取混浊状分离液3–5滴，直接置于解剖镜下观察；如有线虫，就将盛有分离液滴的培养皿，放置于已盛满高温热水、打开盖子的保温瓶口上，进行30–60 s的热杀处理，擦干培养皿底部凝结的小水珠，直接放置于显微镜下（先用低倍物镜，找到目标线虫，再转换到高倍物镜）观察形态特征予以鉴别。（2）用显微镜直接观察线虫分离液。用培养皿盛放贝尔曼漏斗放出的线虫悬液适量，直接移放在光学显微镜下观察，用低倍镜调整焦距，找到线虫，一手移动培养皿，不断变换所观察线虫的位置，一手不断调整焦距。在10倍的接物镜下松材线虫的基本形态鉴定特征如头部、中食道球、阴门、交合刺、尾形等都可以清晰地观察到。发现分离液中存有松材线虫时，挑取线虫并制成临时玻片标本进一步观察。

形态鉴定：依据雌雄成虫的形态，主要是雌成虫的形态进行鉴定。但分离到的线虫没有成虫或极少时，需进行培养，以获得大量雌雄成虫供鉴定。