E.coli DH5α感受态制备步骤_感受态的制备方法

E.coli DH5α感受态制备步骤由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“感受态的制备方法”。

E．coli DH5α感受态细胞制备的主要步骤：

① 从菌种的甘油冻存管中取一环菌液在LB平板上分区划线，37 ℃培养至单菌落长出。

② 挑取平板上的单菌落转移到2~5 mL的LB培养基中（37 ℃，200 rpm）过夜培养。

③ 取过夜培养的菌液200 μL加入到20 mL的LB培养基中（37 ℃，200 rpm）培养至OD600为0.4~0.7.④ 培养好的菌液转移至预冷的50 mL离心管中，冰上静置10 min。⑤ 离心（4 ℃，2500 g，10 min）。

⑥ 弃上清液，加入4 mL 0.1 mol/L CaCl2，冰上重悬后静置10 min。⑦ 离心（4 ℃，2500 g，10 min）。

⑧ 弃上清，加入2 mL 0.1 mol/L CaCl2（溶液中含终浓度为15%的甘油），重悬沉淀，冰上静置30 min。

⑨ 分装（100 μL/tube），-80 ℃保藏。