E.coli DH5α感受态制备步骤_感受态的制备方法

2020-02-27 其他范文 下载本文

E.coli DH5α感受态制备步骤由刀豆文库小编整理,希望给你工作、学习、生活带来方便,猜你可能喜欢“感受态的制备方法”。

E.coli DH5α感受态细胞制备的主要步骤:

① 从菌种的甘油冻存管中取一环菌液在LB平板上分区划线,37 ℃培养至单菌落长出。

② 挑取平板上的单菌落转移到2~5 mL的LB培养基中(37 ℃,200 rpm)过夜培养。

③ 取过夜培养的菌液200 μL加入到20 mL的LB培养基中(37 ℃,200 rpm)培养至OD600为0.4~0.7.④ 培养好的菌液转移至预冷的50 mL离心管中,冰上静置10 min。⑤ 离心(4 ℃,2500 g,10 min)。

⑥ 弃上清液,加入4 mL 0.1 mol/L CaCl2,冰上重悬后静置10 min。⑦ 离心(4 ℃,2500 g,10 min)。

⑧ 弃上清,加入2 mL 0.1 mol/L CaCl2(溶液中含终浓度为15%的甘油),重悬沉淀,冰上静置30 min。

⑨ 分装(100 μL/tube),-80 ℃保藏。

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