新微生物学实验复习提纲_微生物学实验复习汇总

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微生物学实验复习提纲

1.研究微生物学的基本技术有哪些？（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术）

2.光学显微镜又称“复式显微镜”，由哪两部分组成？显微镜的什么最为关键？为什么？

3.油镜的放大倍数为多少？与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头间滴加什么？其什么作用？

4.影响显微镜分辨率的因素有哪些？（光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率）

5.油镜使用后应怎样处理？镜油擦拭的正确方法是怎样的？

6.制造接种环、接种针的金属常用,原因是.7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适？5~8套。

8.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)处，塞一小段约1.5cm长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。

9.空的玻璃器皿一般用，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。

10.11.简单染色的原理是什么？其主要操作步骤是什么？固定的作用是什么？染色过程中应注意哪些环节？

12.革兰氏染的原理及步骤是什么？革兰氏染色后的正确结果是什么颜色？

13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：（1）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；

（2）脱色，此环节最关键。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。

（3）菌龄也影响染色结果。如阳性菌培养时间过长或已死亡及部分菌自行溶解了，会出现阴性反应。

14.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？

15.霉菌的直接制片观察法常用什么染色剂？此染液的优点是什么？

16.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？

17.为什么霉菌菌落的中央与边远、正面与反面在外形、颜色、构造等方面常有明显的差别？放线菌、细菌和酵母菌呢？（理解）

18.测量微生物大小的工具是什么？包括哪两部分？功能各是什么？

19.如何校正目镜测微尺刻度？计算公式？更换不同放大倍数的目镜活物镜时，是否需要重新校正？

20.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？

21.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？

22.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？

23.培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？

24.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？

25.摆斜面的正确方法是什么？

26.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？

27.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？

28.牛肉膏蛋白胨培养基、高氏Ⅰ号培养基、马丁氏培养基、马铃薯（PDA）培养基、麦芽汁培养基或豆芽汁培养基分别培养什么微生物？

29.什么是选择性培养基？试分析教材P98酵母菌富集培养基和Ashby无氮培养基的选择原理。

30.什么是鉴别性培养基？试以EMB培养基为例，分析其鉴别作用的原理。

31.蛋白胨称取时应怎样？为什么？溶解可溶性淀粉的正确方法是什么？高氏Ⅰ号培养基中0.001%FeSO4 7H2O配制的正确方法是什么？

32.配制合成培养基加微量元素时最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元素？

33.马丁氏培养基中孟加拉红、链霉素的作用是什么？链霉素应如何加入？

34.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基）

答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；③将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；④将平板置于温度适当的条件下（37℃）培养，观察是否有菌落产生；⑤将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；⑥挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；⑦将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。

35.什么是灭菌？消毒？列表比较高温灭菌或消毒的各大方法的温度、时间、适用对象？

36.干热灭菌原理是什么？为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？

37.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？

38.高压蒸汽灭菌的关键技术是什么？（压力上升之前需将锅内冷空气排尽）

39.高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？

免？

40.对含糖（如葡萄糖或乳糖等）培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用大多压力、多长时间灭菌为宜？

41.对血清、噬菌体浓缩液、氨基酸溶液、维生素溶液、抗生素溶液能否进行高压蒸汽灭菌？应采用何种方法除菌为宜？

42.紫外线灭菌的原理及适用对象是什么？

43.过滤除菌法的适用对象是什么？缺点是什么？

44.微生物的平板分离纯化技术是哪位科学家发明的？德国人科赫

45.微生物分离纯化常用的方法有哪些？划线法、单细胞挑取法、稀释平板法、选择培养基法

46.如果要从自然界中筛选能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？写出简明的实验方案。

47.如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为该如何做？

48.稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到45～50左右才能倾入到装有菌液的皿内？

49.在恒温箱中培养微生物时为何培养皿均需倒置？（①防止培养基水分蒸发②防止冷凝水的流动造成平板表面的“交叉感染”，影响单个菌落的形成③防止外物掉在培养基上.）

50.请设计分离筛选下列微生物菌种的试验方案（提示：包括采样、稀释液制备、培养基名称、培养温度、培养时间、分离纯化方法等）

（1）土壤中链霉素产生菌的分离、纯化

（2）啤酒泥或酒曲发酵窖泥中酵母菌的分离、纯化

（3）甜酒药曲或酿酒种曲中霉菌的分离、纯化

51.常用菌种保藏方法有哪些？有何优缺点？

52.ATCC采用菌种保藏的方法是什么？

53.常用于测定微生物数量的方法有哪些？

54.什么是显微直接计数法？工具是什么？此方法的优缺点？缺点怎样克服？

55.利用血球计数板计数时，如何计数？计算公式？

56.简述测定化学消毒剂的杀（抑）菌作用的滤纸片法。

57.某公司推出一种新型饮料，并声称是100％的纯天然产品，不含防腐剂，利用你所掌握的微生物学知识，试设计一个简单实验来初步判断此饮料是否含防腐剂。

58.根据深层琼脂培养的特征来判断好氧菌、微好氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌、耐氧厌氧菌。P103

59.什么是IMViC试验？硫化氢试验？作用是什么？各试验的原理是什么？结果是什么？

60.我国卫生部门规定的饮用水标准是什么？1mL自来水中的细菌总数不可超过100个（37℃，培养24h），而1000mL自来水中的大肠菌群数则不能超过3个（37℃，培养24h）。

61.水中细菌总数和大肠菌群值各反映了什么？

62.水中细菌总数的测定的方法是什么？（平板菌落计数法）自来水、湖水采集的正确方法是什么？

63.水中大肠菌群的检测方法---多管发酵法的基本原理？包括哪3个部分？阳性和阴性判断的依据是什么？德汉氏小管起什么作用？溴甲酚紫起什么作用？

64.EMB培养基的鉴别大肠菌群原理是什么？EMB培养基含哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？（乳糖是碳源起选择作用，大肠菌群能利用，而很多其他细菌不能利用；蛋白胨是氮源；NaCl是无机盐；伊红和美蓝作为指示剂）大肠菌群在EMB培养基上的典型菌落特征是什么？

65.包括肠杆菌科的埃希氏菌属（Escherichia）、肠杆菌属（Enterobacter）、柠檬酸细菌属（Citrobacter）和克雷伯氏属（Klebsiella）。

66.影响微生物生长的主要因素有、和等。

67.细菌、放线菌、酵母菌、霉菌培养的温度一般为多少？培养时间？

68.名词解释：无菌技术/操作、分辨率、菌落、菌苔、简单染色法、革兰氏染色法、培养基、鉴别培养基、选择培养基、消毒、灭菌、纯培养、石炭酸系数、大肠菌群

革兰氏染色法：丹麦医生Gram于1884年创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法。基本步骤是：结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色、复染剂复染。染色结果为蓝紫色的细菌为G+，红色的细菌为G-。

无菌技术/操作：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术。

纯培养：在实验室条件下由一个细胞繁殖而产生的后代。

实验报告中的思考题要认真复习