手足口病病原学分析_有关手足口病病原学
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手足口病病原学分析
分析池州地区手足口病的流行病学和病原学特征，为手足口病防控提供科学依据。方法
采集2010-03/2010-12池州市各地送检的133例手足口病临床诊断患者的咽拭子，应用RT-PCR技术检测样本中肠道病毒(EV)、肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）。结果
133例手足口病临床诊断病例咽拭子中，检测到肠道病毒阳性79份，EV71阳性28份，CoxA16阳性24份，EV71和 CoxA16的阳性率为21.05%和18.05%。6例手足口病重症病例中，EV71病毒感染病例4例。结论
EV71和 CoxA16是2010年池州地区手足口病的主要病原体，而EV71是引起手足口病重症病例的主要类型。
手足口病（hand-foot-month disease,HFMD）是由多种肠道病毒（enterovirus，EV）引起的一种常见急性传染病，多发于学龄前儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高。临床表现为发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹等特征。引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），均属微小核糖核酸病毒科、人肠道病毒属。目前国内手足口病的病原体以柯萨奇病毒A组16性（CoxA16）和肠道病毒71型（EV71）为主[1]，两者所致的手足口病在临床上难以区别，但EV71感染除了引起手足口病外，还能够引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎、急性弛缓性瘫痪等多种与神经系统相关的疾病[2]。为了解池州地区手足口病病原体的分布特征，探索相应的防治策略和应对措施，对2010年收集的133例临床诊断疑似病例标本采用分子生物学技术进行EV71和CoxA16病毒核酸检测，为该地区手足口病的诊断、预防和控制措施的制定提供实验室依据。1 材料与方法 1.1 材料
1.1.1 标本来源
选取2010年池州地区各大医院临床诊断为手足口病部分病例的咽拭子标本保存于病毒保存液中，4℃冷链运输。-70℃保存备用。
1.1.2 主要仪器和试剂
仪器：AB2720扩增仪、DYY-6C型水平电泳仪、Gel Doc XR凝胶成像仪。试剂：德国Qiangen公司的RNeasy Mini Kit(货号74104）和One step RT-PCR Kit(货号210212)，引物由安徽省疾控中心提供。引物核酸序列：
肠道病毒通用引物PE2(上游)：5,-TCCGGCCCCTAGATGCGGCTAATCC-3， 肠道病毒通用引物PE1(下游)：5,-ACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTCC-3,;EV71-S(上游)：5,-GCAGCCCAAAAGAACTTCAC-3， EV71-A(下游):5,-ATTTCAGCAGCTTGGAGTGC-3,;CoxA16-S(上游):5,-ATTGGTGCTCCCACTACAGC-3， CoxA16-A(下游):5,-TCAGTGTTGGCAGCTGCAGG-3,。1.2 方法
1.2.1 核酸提取
采用德国Qiangen公司的试剂盒，按照说明书操作，最终收集RNA模板50ul备用。
1.2.2 RT-PCR 采用德国Qiangen公司的试剂盒，按照说明书配制。反应体系25ul,每次实验均设置阴性对照和阳性对照。扩增程序：60℃1min, 42℃10min, 50℃30min, 95℃15min；94℃30s, 52℃30s, 72℃1min,40个循环；72℃7min；4℃保存。
1.2.3 扩增产物检测
用0.5×TBE缓冲液配制2%琼脂糖凝胶，上样后100V恒压电泳40分钟，用凝胶成像仪分析相应PCR产物条带，紫外灯下观察特异性核酸条带。以DL2000marker作参照，有目的片段条带出现即判为阳性。2 结果 2.1 RT-PCR核酸检测结果
133例临床诊断病例标本总肠道病毒阳性79例，阳性率59.40%，其中EV71阳性28例，阳性率21.05%；CoxA16阳性24例，阳性率18.05%；非EV、CoxA16其他肠道病毒阳性27例，阳性率20.30%.2.2临床诊断病例性别别肠道病毒阳性率
133例中，男性73例，总肠道病毒41例，阳性率56.16%；女性60例，总肠道病毒38例，阳性率63.33%。见表1。
2.3 临床诊断病例年龄别肠道病毒阳性率
133例中，最小年龄6个月，最大12岁，以1岁至4岁患儿为主。见表2。
2.4临床诊断病例地区别肠道病毒阳性率
来自不同县区病例的检测结果见表3。
2.5 不同病情程度病例的病原学检测结果
133例病例中，轻型病例127例，EV71阳性24例，CoxA16阳性24例，非EV71、CoxA16其他肠道病毒26例；重症病例6例，EV71阳性4例，非EV71、CoxA16其他肠道病毒1例。见表4。3讨论
手足口病是严重危害儿童健康的全球性疾病，世界大部分国家和地区均有此病流行的报道。1957年新西兰首次报道，1958年加拿大Robinson和Rhodes首次从患者中分离出柯萨奇病毒[3]，1959年提出HFMD命名。已知引起手足口病的肠道病毒有20多种（型），其中以CoxA16和EV71最为常见。我国自1980年开始有HFMD的报道[4]。1985年前CoxA16是我国手足口病的主要病原体，但最近的研究结果显示EV71在HFMD病原学中占有越来越重要的位置。2008年3月安徽阜阳发生较大规模的EV71感染暴发流行[5]，引起国内外的高度关注。与CoxA16相比，EV71更易导致中枢神经系统并发症，它可引发致死性脑病、脑出血甚至心肌炎猝死[6,7]。但EV71在不同时间和地区流行的临床症状各异，与CoxA16难以区别，且CoxA16往往伴随EV71流行[8]。
本研究对池州地区各大医院临床诊断病例的133份咽拭子标本进行了病原学检测，结果显示133份标本呈现总肠道病毒阳性79份，阳性率59.40%，其中EV71阳性28份，阳性率21.05%，CoxA16阳性24份，阳性率18.05%，非EV、CoxA16其他肠道病毒阳性27例，阳性率20.30%。从性别分布来看，男女比例为无差别。从年龄分布来看，4岁以下儿童是手足口病发病的主要人群（68.42%），故应加大对托幼机构及学校传染病防控工作的指导，大力普及手足口病防治知识，增强群众自我保健意识，尤其要积极做好4岁以下婴幼儿的个人防护，减少疾病的发生[9]。从县区发表来看，石台县虽然地偏人稀、人口密度较低，但病例阳性率较高，这除与采样技术和送检要求等影响因素有关外，是否与所在地区的地理气候和气温有关，有待进一步研究。133例手足口病例中，有6例重症病例，其中4例为EV71型病毒，这进一步证明了EV71病毒感染性强，致病率高，易引起神经毒性，侵犯肺心脑，使一些患儿病情较重，甚至死亡[10]。
由于手足口病至今仍无有效的疫苗和特异的治疗手段，因此加强疫情监测，及时掌握病原感染特征，早发现，早隔离，早治疗是预防和控制本病流行的关键[11]。加强对实验室建设，建立市级手足口病网络实验室，规范手足口病标本采集和检测技术，提供对手足口病病原体快速而准确的检测，对手足口病的防治和动态监测具有重要的作用。
4参考文献
［1］朱汝南，钱渊，邓洁，等.北京市儿童手足口病与肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染有关[J].中华流行病学杂志，2007，28（10）：1004-1008 ［2］ 杨秀惠，严延生.手足口病的病原学研究进展[J].传染病信息，2008，21（3）：129-131 ［3］HSUEH C,JUNG M,SHIH S R,et al.Acute encephalomyelitis during an outbreak of enterovirus type 71 infection in Taiwan:report of an autopsy case with pathologic,immunofluorescence and molecular studies[J].Modern Pathology,2000,13(11)1200-1205 ［4］何家鑫，沈晓娜.手足口病流行特点及其防治[J].海峡预防医学杂志，2001，7（3）：22-24 ［5］安徽省卫生厅.我省阜阳积极防治肠道病毒感染疾病[EB/OL].[2008-06-20].http://www.daodoc.com ［6］牛录青，董晓君，董伟.一起手足口病的临床及流行病学分析[J].中国综合临床，2000，16（3）：219 ［7］王晓华.小儿手足口病1698例[J].中华传染病杂志，2000，（12）12：246-247 ［8］Brown BA，Kilpatrick D R,Oberste M S,et al.Serotype specific identification of enterovirus 71 by PCR[J].J Clin Virol,2000,16(2):107-112 ［9］ 檀晓娟，许文波.肠道病毒71型的分子流行病学现况[J].中国疫苗和免疫，2008，4（4）：361-367 ［10］张红，黄一伟，刘运芝，等.湖南省197例手足口病临床诊断病例的病原学检测结果[J].实用预防医学，2008，15（6）：1933-1935 ［11］ 中华人民共和国卫生部.手足口病预防控制指南（2008年版）[M].2008.
