DH5α感受肽细胞制备_dh5感受肽细胞制备

DH5α感受肽细胞制备由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“dh5感受肽细胞制备”。

感受态细胞的制备

一、实验试剂及材料 1.AMP－ LB液体培养基

2.0.1M CaCL2溶液； 3.AMP+固体培养板

4.DH5α大肠杆菌；

5.10ml玻璃试管、牙签、5ml刻度吸管、1.5ml离心管、150ml三角烧瓶均需高压灭菌； 6.20µl枪头、200µl枪头、1000µl枪头及加样器（法国Gilson公司）。

二、实验设备 1.YJ-875医用净化工作台

2.CF16RX低温高速离心机

3.HH.B11-500型电热恒温培养箱

4.BCD-216KF冰箱

5.CHB-100恒温金属浴

三、实验方法

(一)DH5α大肠杆菌活化（注意无菌操作）1.实验前30分钟紫外消毒净化工作台。2.取两只高压过的10ml玻璃试管，向其中各加入3ml AMP-LB液体培养基。3.用无菌牙签挑取少量冻存DH5α大肠杆菌菌液，加入到试管中。4.将试管固定于37℃预热的空气浴振荡器中，200-250转∕分，过夜振荡培养。(二)DH5α大肠杆菌增殖（注意无菌操作）5.实验前30分钟紫外消毒净化工作台。6.取20ml AMP-LB液体培养基（根据所要制备的感受态的量确定AMP-LB液体培养基的体积）加入到150ml三角烧瓶中。7.取200µlDH5α大肠杆菌（与AMP-LB液体培养基的体积比为1:1000）菌液加入到三角烧瓶中。

8.将三角烧瓶固定于37℃预热的空气浴振荡器中，200转∕分，振荡培养至菌液呈现均匀细沙状。（约1-1.5小时）

(三)（大量或小量）制备感受态细胞

100X100µl感受态

15.实验前30分钟紫外消毒净化工作台。制冰

1kg。

16.取1.5ml

（二）中的DH5α大肠杆菌菌液加

入到1.5ml离心管，根据实验具体要求确定管数。

17.4℃ 4000g 离心10分钟。

18.弃上清，向各1.5ml离心管中加入冰预冷的0.1M CaCL2溶液500µl，混匀后置于冰上10分钟。

19.4℃ 4000g 离心10分钟。

20.弃上清，向各1.5ml离心管中加入冰预冷的0.1M CaCL2溶液100µl，混匀后置于4℃冰箱内备用。