生物制药复习提纲和答案_生物制药技术复习提纲
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基本概念：
1.生物药物
是利用生物体、生物组织或其成分，综合应用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法进行加工、制造而成的一大类预防、诊断、治疗制品。2.生物技术药物
是指采用DNA重组技术、单克隆抗体技术或其他生物技术研制的蛋白质、抗体或核酸类药物。生物技术药物可以是在药理上有高度活性的，也可以是在免疫或其他生理系统上有活性的。生物技术药物可以分为三大类，即重组蛋白质、治疗性抗体和核酸。3.生物制品
用微生物及微生物代谢产物或动物血清制成的用于预防、诊断和治疗的制品。
4.生物制药工艺学
是从事各种生物药物的研究、生产和制剂的综合性应用技术科学。研究内容包括生化制药工艺、生物制品制造与相关的生物医药产品的生产工艺。主要讨论各类生物药物的来源、结构、性质、制造原理、工艺过程、生产技术操作和质量控制。5.抗生素
青霉素、链霉素、红霉索等一类化学物质的总称。它是生物，包括微生物、植物和动物，在其生产活动过程中所产生，并能在低微浓度下有选择性地抑制或杀灭其他微生物或肿瘤细胞的有机物质。6.热原质
热原质是在生产过程中由于被污染后由杂菌所产生的一种内毒素。7.四环类抗生素
是以四并苯为母核的一类有机化合物。金霉素、土霉素、四环素、地美环素。四环类抗生素可与微生物核糖核蛋白体30S亚基接合，通过抑制氨基酰-tRNA与起始复合物中核蛋白体的结合，阻断蛋白质合成时肽链的延长。8.大环内酯类抗生素
由链霉菌产生的弱碱性抗菌素，因分子中含有一个内酯结构的14或16元环而得名，红霉素是本类药物最典型的代表。大环内酯类作用于细菌细胞核糖蛋白体50s亚单位，阻碍细菌蛋白质合成，属于生长期抑制剂。9.β-内酰胺类抗生素 10.氨基糖苷类抗生素
由氨基环醇(aminocyclitol)、氨基糖(aminosuger)和糖组成的抗生素的总称。
11.耐药性
12.干扰素
系指由诱导剂诱导有关生物细胞所产生的一类高活性、多功能的诱生蛋白质。这类诱生蛋白质从细胞中产生和释放之后，作用于相应的其它同种生物细胞，并使其获得抗病毒和抗肿瘤等多方面的免疫力。有α型、β型和γ型及许多亚型。13.硫酸软骨素
硫酸软骨素一般含有50～70个双糖单位，链长不均一，相对分子质量在1～3万，硫酸软骨素按其化学组成和结构差异，又分为A、B、C、D、E、F、H等多种。它们均由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖组成，只是硫酸基团位置不同而己。14.肝素
属高分于化合物，分于量6 000～20 000以前肝素钠一般都由动物肝脏中提取，现在大多从猪、羊、牛等动物的肠粘膜中提取，亦可从肺脏和心脏中提取。作为一种重要的生化药物，是一簇酸性粘多糖化合物的统称，它是由已糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸）与硫酸氨基葡萄糖分子以一定的比例交替联结形成的具有六糖或八糖单位的线型链状大分子 15.维生素
是维持机体正常代谢机能的一类化学结构不同的小分子有机化合物，它们在体内不能合成，大多需从外界摄取。
16.激素
是生物体产生的，对机体代谢和生理机能发挥高效调节作用的化学信使分子。17.亚基疫苗
利用病原体的某一部分通过基因工程克隆而制得的疫苗称为亚基疫苗。18.活体重组疫苗
通过基因工程的方法，对非致病性微生物(细菌和病毒)进行改造，使之携带并表达某种特定病原体的抗原决定簇基因，产生免疫原性；或通过基因工程的方法修饰或删除致病性微生物的毒性基因，使之仍保持免疫原性所制成的疫苗。19.核酸疫苗
核酸疫苗就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内，使外源基因在生物体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫反应。20.基因治疗
基因治疗是将具有正常功能的基因转移到病人体内并发挥功能，纠正病人体内所缺乏的蛋白质或赋予机体新的抗病功能。更为广义的基因治疗还包括从基因水平对基因表达的调控。
21.人工免疫
人为地给机体输入抗原以调动机体的免疫系统，或直接输入免疫血清，使其获得某种特殊抵抗力，用以预防或治疗某些疾病者，称为人工免疫 22.人工自动免疫
是给机体输入抗原物质，使免疫系统因抗原刺激而产生类似感染时所发生的免疫过程，从而产生特异性免疫力。这种免疫力出现较慢，常有1～4周诱导期，但维持较久，可从半年到数年。
23.人工被动免疫
输入免疫血清(含特异性抗体)，使机体获得一定免疫力，以达到防治某些疾病目的，称为人工被动免疫。
24.乙肝基因工程疫苗
将乙型肝炎病毒(HBV)基因组中乙肝表面抗原(HBsAg)的DNA序列构建到表达载体上，并在宿主细胞中表达，所表达的抗原经纯化后制备成的重组亚单位乙肝疫苗。25.抗体
是由抗原刺激机体后，由淋巴B细胞经分化增殖的浆细胞合成、分泌的，能与相应抗原特异结合并具有多方面免疫功能的球蛋白。26.单克隆抗体
仅识别抗原分子上同一抗原位区的由同一克隆细胞产生的抗体。27.人源化抗体
人源化抗体主要指鼠源性单克隆抗体的基因克隆及 DNA 重组技术改造，重新表达的抗体。其大部分氨基酸序列为人源序列所取代，既基本保留亲代鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了鼠异源性。28.基因工程抗体 是利用DNA重组技术，通过对抗体分子基因结构与功能了解，有目的地在基因水平上对抗体分子进行切割、拼接或修饰，或者直接合成基因序列，再将基因导入细胞表达产生的一类抗体。
29.前体物质
在抗生素生物合成中，菌体利用它以构成抗生素分子中的一部分而其本身又没有显著改变的物质，称为前体(precursor)。
简述题 1.新药筛选基本方法
（一）、随机筛选
（二）、经验式重复筛选
（三）、药物合理设计与筛选
（四）、高通量筛选
2.新药研究和开发的主要过程
1、确定研究计划
2、准备化合物
3、药理筛选
4、化学实验
5、临床前I期
6、临床前II期
7、I期临床
8、II期临床
9、III期临床10．注册申请上市（2-3年）11．售后监测
3.生物活性物质的浓缩的主要方法？
（一）盐析浓缩：硫酸铵沉淀蛋白质
（二）有机溶剂沉淀浓缩
（三）用葡聚糖凝胶（Sephadex）浓缩
（四）用聚乙二醇透析浓缩
（五）超滤浓缩
（六）真空减压浓缩与薄膜浓缩
4.试述活性物质的保护措施
1、采用缓冲盐系统
在生物药物制备中，常用的缓冲盐有磷酸缓冲盐，柠檬酸缓冲盐，Tris缓冲液，醋酸缓冲盐，碳酸缓冲盐，硼酸缓冲盐和巴比妥缓冲盐等。
2、添加保护剂
防止某些生理活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏，如巯基是许多活性蛋白质和酶催化活性基团，极易被氧化，故提取时，常添加某些还原剂如半胱氨酸，-巯基乙醇。对易受重金属影响的，可添加EDTA。
3、抑制水解酶的作用
4、其它保护措施（冷、热、酸、碱）
5.试述生物活性物质的浓缩方法
（一）盐析浓缩：硫酸铵沉淀蛋白质
（二）有机溶剂沉淀浓缩
在生物大分子的水溶液中，逐渐加入乙醇，丙酮等有机溶剂，可以使生化物质的溶解度明显降低，从溶液中沉淀出来。
（三）用葡聚糖凝胶（Sephadex）浓缩
（四）用聚乙二醇透析浓缩
（五）超滤浓缩
（六）真空减压浓缩与薄膜浓缩
真空减压浓缩在药物生产中使用较为普遍，具有生产规模较大，蒸发温度较低，蒸发速度较快等优点。
薄膜浓缩器的加速蒸发的原理是增加汽化表面积。使液体形成薄膜而蒸发，成膜的液体具有较大的表面积，热传播快而均匀，没有液体静压的影响，能较好地防止物料的过热现象。
6.试述生化物质分离纯化的基本步骤
1、将目标药物成分从起始原材料中释放出来；
2、从提取物中去除固体杂质成分；
3、去除可溶性杂质成分；
4、除去水或其他类别的溶剂，富集或浓缩目标药物成分；
5、去除残留杂质和污染物成分，使药物成分能够达到所需的纯度；
6、对目标药物成分进行必要的后加工处理（如修饰、加入稳定剂、佐剂等）以保护或提高药物活性等。
7.生物活性物质分离制备设计基本阶段（1）确定制备物的研究目的及建立相应的分析鉴定方法。（2）制备物理化性质稳定性的预备试验。（3）材料处理及抽提方法的选择。（4）分离纯化方法的摸索。（5）产物均一性测定。
8.靶向给药系统
采用乳化技术、脂质体制备技术、微型包囊和微型成球技术，使药物浓集于靶器官、靶组织。靶细胞的靶向给药系统属于第4代剂型，可用于恶性肿瘤等疾病的治疗。近年来受到普遍关注的口服结肠定位给药系统是一类对pH敏感的结肠定位释药制剂。口服结肠靶向给药系统中的药物在胃、十二指肠、空肠和回肠不释放，只有当药物达到人体回盲部后启结肠较高的pH环境下溶解聚合物，才能使给药系统把药物释放出未，并且在结肠部发挥局部治疗作用。
9.缓、控释制剂
缓释控释制剂与药物在体内浓度有关，而与给药时间无关的基本理论的基础上发展起未的。是一类采用新型药用辅料，通过膜控技术、骨架阻滞技术和包衣技术等来控制片剂、胶囊剂的释药速度，从而实现定时、定速释放，属于第3代剂型就延长有效血药浓度的持续时间和提高用药的安全度。缓释制剂和控释制剂的主要区别在于控释制剂是按零级速率释放药物，其释放量不受时间影响，释放速度是恒速或接近恒速，血药浓度平稳，峰谷波动很小。10.根据抗生素的化学结构抗生素可分为几类？每类其结构有何特点？每类举1药品。以青霉素为例写出发酵生产青霉素的工艺路线。(1)β-内酰胺类抗生素：包括青霉素类、头孢菌素类等。它们都包含一个四元内酰胺环。这是在当前最受重视的一类抗生素。
(2)氨基糖苷类抗生素：包括链霉素、庆大霉素等。它们既含有氨基糖苷，也含有氨基环醇的结构。
(3)大环内酯类抗生素：如红霉素、麦迪霉素(medicamycin)。它们含有一个大环内酯作配糖体，以苷健和1～3个分子的糖相连。
(4)四环类抗生素：如四环素、土霉素等。它们以四并苯为母核。
(5)多肽类抗生素：如多粘菌素、杆菌肽等。它们多由细菌、特别是由产孢子的杆菌产生，并含有多种氨基酸，经肽键缩合成线状、环状或带侧链的环状多肽。
11.12.微生物产生耐药机理是什么？
影响青霉素结晶的因素？
(1)水分的影响
(2)温度的影响
(3)污染数高低对结晶的影响(4)青霉素与醋酸钾摩尔比关系
13.去除四环素差向异构物的方法 ？
（1）制成尿素复盐转四环素盐酸盐（2）制成氯化钙复合物（3）制成甲酰复合物
14.用现代生物技术提高抗生素产量的方法
1．将产生菌基因随机克隆至原株直接筛选高产菌株 2．增加参与生物合成限速阶段基因的拷贝数 3．强化正调节基因的作用 4．增加抗性基因
15.乙肝病毒(HBV)基因在真核细胞中的表达途径
①将HBV的S、S2或S1基因重组质粒转化酵母，用重组酵母生产HB疫苗； ②将S、S2或S1基因重组质粒转化哺乳动物细胞；
③将S、S2或S1基因插入痘苗病毒DNA非必需区，传染中华地鼠卵巢细胞，大量培养该动物细胞株生产HB疫苗；
④将S、S2或S1基因插入昆虫核多角体病毒DNA非必需区，转染家蚕和蝶蛹生产HB疫苗。
16.试述HBA的DNA结构
①小蛋白(S蛋白)，为S基因编码的由226个氨基酸残基组成的多肽，是HBsAg和HBV包膜的主要成分，也是HBV的主要蛋白；
②中蛋白(M蛋白)，由S蛋白和前S2基因编码的55个氨基酸残基多肽(前S2蛋白)组成，它具有一个多聚人血清白蛋白(pHSA)受体位点； ③大蛋白(L蛋白)，为M蛋白和前S1基因编码的108～109个氨基酸残基多肽(前S1蛋白)组成。
17.用于制备病毒类疫苗的毒株，一般需具备哪几个条件？
①必须持有特定的抗原性，能使机体诱发特定的免疫力，阻止相关病原体的入侵或防止机体发生相应的疾病。
②应有典型的形态和感染特定组织的特性，并在传代的过程中，能长期保持其生物学特性。③易在特定的组织中大量繁殖。
④在人工繁殖的过程中，不应产生神经毒素或能引起机体损害的其他毒素。
⑤如是制备活疫苗，毒株在人工繁殖的过程中应无恢复原致病力的现象，以免在使用时，诱发机体发生相应的疾病。
⑥在分离时和形成毒种的全过程中应不被其他病毒所污染，并需要保持历史记录。用于制备活疫苗的毒种，往往需要在特定的条件下将毒株经过长达数十次或上百次的传代，降低其毒力，直至无临床致病性，才能用于生产。18.简述核酸疫苗的特点？
(１)免疫保护力增强：接种后蛋白质在宿主细胞内表达，直接与组织相容性复合物MHCI 或II类分子结合，同时引起细胞和体液免疫，对慢性病毒感染性疾病等依赖细胞免疫清除病原的疾病的预防更加有效。
(２)制备简单，省时省力：核酸疫苗作为一种重组质粒，易在工程菌内大量扩增，提纯方法简单，可制备多价核酸疫苗。
(３)同种异株交叉保护：这是基因疫苗的最大优点之一。在制备基因疫苗时，可通过对基因表达载体所携带的靶基因进行改造，从而选择抗原决定簇。
(４)应用较安全：接种核酸疫苗后，蛋白质抗原在宿主细胞内表达，无因毒力返祖或残留毒力病毒颗粒而引发疫病的危险，也不会引起对机体的不良反应。
(５)产生持久免疫应答：免疫具有持久性，一次接种可获得长期免疫力，无需反复多次加强免疫。
(６)贮存、运输方便：核酸疫苗的质粒DNA稳定性好，无须冷藏。
(７)可用于防治肿瘤：核酸疫苗可以诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞)，CTL应答也是机体杀死癌变细胞的有效清除途径。
19.核酸疫苗的纯化步骤
(1)收集、裂解细胞的和质粒的初步抽提
细胞的收集可利用离心的方法完成。裂解细胞(使细菌的细胞壁和细胞膜破裂的过程)一般有煮沸法、SDS碱裂解法、非离子型去垢剂法等。
(2)质粒DNA的纯化 ①聚乙二醇(PEG)沉淀法 ②氯化铯-溴乙锭梯度平衡离心法 ③柱层析法
20.DNA疫苗为治疗恶性肿瘤提供哪些新的思路
①激发免疫系统杀死致癌病毒；
②激发免疫系统识别并消除表达共同癌细胞信号的癌细胞； ③转染和表达基因工程蛋白，从而使癌细胞成为更好的免疫靶子。将编码肿瘤相关抗原的基因转导到肿瘤细胞内表达，可提高肿瘤免疫原性，从而增强宿主抗肿瘤的免疫应答。
21.影响核酸疫苗免疫效果的因素
１、质粒载体和启动子的选择２ 注射途径与方法 ３、接种部位的预处理４、接种剂量与次数５、免疫佐剂
22.试述抗体分子的基本结构？
抗体分成3个部分，即两个Fab片段和一个Fc片段。
抗体的结构抗体是机体在抗原物质刺激下由浆细胞产生的一类能与抗原发生特异结合反应的免疫球蛋白。其基本结构是由（两重H链两轻L链）四条肤链组成，四链互以-S-S键结合，形成一个“Y”形的四链分子。每一链又分为二段，一段为恒定部分，该部分的氨基酸序列是相同的；另一段为可变部分，这一部分的氨基酸序列各不相同，因而其上具有抗原结合位点。主要位于“Y”的两臂末端1 /2L链和1 /4H链相结合部位。抗体的特异性就是由结合部位的构象决定的。只有分子构象与抗体结合部位的分子构象互补的抗原才能与该种抗体结合。这样一个抗体就可和两个抗原结合。此外抗体的柄部Fc段上有补体结合区。
23.试述B淋巴细胞杂交瘤选择培养基的原理？
细胞的DNA合成有内源性和外源性两种途径。内源性途径就是利用Gln(谷氨酰胺)或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原酶的催化下合成DNA；外源性途径则利用次黄漂呤或胸腺嘧啶在HGPRT(次黄漂呤鸟漂呤磷酸核糖转移酶)或TK(胸腺嘧啶激酶)的催化作用下补救合成DNA。HAT培养基中的氨基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂，因此能有效的阻断DNA合成的内源性途径。B淋巴细胞具有HGPRT和TK这两种酶，因此在内源性途径被阻断后仍能利用HAT培养基中的次黄漂呤和胸腺嘧啶完成合成。但由于B淋巴细胞是正常细胞故不能长期存活。而杂交瘤细胞由于继承了B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性，能够合成HGPRT和TK，故在HAT培养基中可长期存活。在历经2周左右的时间后即可得到该杂交瘤细胞，从而成为制造单克隆抗体的细胞源。
24.单抗纯化策略及注意事项？
腹水或细胞上清液，均含有脂蛋白、脂质、细 胞碎片等杂质，用滤纸去掉脂质和大颗粒，离心去除 细胞碎片和蛋白聚合物，目前纯化方法有十几种，一 般采用盐析、凝胶过滤、离子交换层析和辛酸提取等，现在最有效的方法是亲和纯化法，常用 SPA 或抗小 鼠免疫球蛋白抗体与载体交联。称为 Sepharose 柱，抗体结合上去，然后洗脱。
25.26.简述单克隆抗体制备过程？ 干扰素和干扰素基本功能是什么？ 1.动物体内生长
2.体外培养
3、单克隆抗体的纯化
4、单克隆抗体的性质鉴定
干扰素—系指由诱导剂诱导有关生物细胞所产生的一类高活性、多功能的诱生蛋白质。这类诱生蛋白质从细胞中产生和释放之后，作用于相应的其它同种生物细胞，并使其获得抗病毒和抗肿瘤等多方面的免疫力。有α型、β型和γ型及许多亚型。
IFN具有抗病毒繁殖、抗细胞分裂增殖及调节机体免疫三大基本功能。
（1）抗病毒繁殖：IFN具有发好的广谱抗病毒作用。IFN不是直接中和或杀伤病毒体，而是病毒体做为IFN的诱生剂，启动细胞内抗病毒蛋白质的结构基因，诱导细胞合成抗病毒蛋白质的，从而阻止感染性病毒颗粒的形成，达到抗病毒的目的。
（2）直接抗肿瘤：这主要表现在IFN具有抑制肿瘤细胞增殖，直接溶癌，降低肿瘤细胞的恶性生物学行为及暴露肿瘤特异性表面抗原等功能方面。IFN有抑制细胞癌基因表达，诱导肿瘤细胞分化，促进“逆转”等作用。
（3）间接抗肿瘤：IFN不仅对肿瘤细胞有直接作用，而且还通免疫系统发挥间接作用。IFN是自然杀伤细胞（Natual kill cell,NK）天然的强有力的诱导剂，在体内外IFN皆可促使NK细胞的成熟与活化，增强NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力。
IFN在体内外均能激活巨噬细胞，增强其吞噬和细胞毒功能。
IFN还具有双向免疫调节作用，可调节自身免疫性疾病的过度反应到接近正常水平。
27.微生物转化生产甾类激素的特点是什么？
①可减少化学合成步骤，简化生产设备，缩短生产周期。如由黄体生产炔诺酮，利用微生物法后，可减少6步工序。
②可提高产物得率和质量，降低成本。如用黑根霉羟化孕酮得率达90％以上。
③可进行化学法难以进行的反应，如甾类化合物C-11上的加氧(即羟化)等反应，化学法很难进行，而采用微生物法则比较容易。
④其他生物虽能产生这类羟化酶，但微生物产生的酶系种类最多。据统计，微生物要比哺乳动物多1β、3β、5α、12β、15α、16β等12种羟化酶。
⑤可改善工人的劳动条件，避免或减少使用强酸、强碱或有毒物质。
28.试述胰岛素的结构及作用？
胰岛素（insulin）为含51个氨基酸残基的小分子蛋白质，分子量5808，由含有21个氨基酸的A链和含有30个氨基酸的B链借助2个二硫键联结而成。胰岛素是促进合成代谢、维持血糖正常水平的主要激素。1）对糖代谢的影响
胰岛素加速全身组织，特别是肝脏、肌肉和脂肪组织摄取和利用葡萄糖，促进肝糖原和肌糖原的合成，抑制糖异生，从而使血糖降低。
2）对脂肪代谢的影响
胰岛素可促进脂肪的合成与储存，促进葡萄糖进入脂肪细胞，合成甘油三酯和脂肪酸。胰岛素还抑制脂肪酶的活性，减少脂肪的分解。3）对蛋白质代谢的影响
胰岛素可促进氨基酸进入细胞内；促进脱氧核糖核酸、核糖核酸和蛋白质的合成；抑制蛋白质的分解。由于能促进蛋白质合成，所以胰岛素对机体的生长有调节作用，但需与生长素共同作用，促生长效果才显著。
29.核酸类药物有哪些？
核酸类药物包括：核酸、核苷酸、核苷、碱基及其衍生物。第一类为具有天然结构的核酸类物质，有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促进缺氧组织恢复正常生理机能。临床上用于放射病，血小板减少症，急慢性肝炎，心血管疾病，肌肉萎缩等代谢障碍。如肌苷，ATP，辅酶A，脱氧核苷酸，肌苷酸等
第二类为自然结构碱基、核苷、核苷酸结构的类似物或聚合物，这一类核酸类药物是当今治疗病毒，肿瘤，艾滋病得重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。
30.酶类药物的结晶方法有哪些？
1）盐析法2）有机溶剂法3）复合结晶法4）透析平衡5）等电点法
31.什么是尿激酶，尿激酶有什么作用？
尿激酶（urokinase，UK），具有激活纤溶酶原（Pfasmingen）转变为纤溶酶（Plasmin）进而产生纤维蛋白溶解作用的一种蛋白水解酶。
32.简述肝素结构、性质及制造过程？
肝素作为一种重要的生化药物，是一簇酸性粘多糖化合物的统称，它是由已糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸）与硫酸氨基葡萄糖分子以一定的比例交替联结形成的具有六糖或八糖单位的线型链状大分子，①提取：取新鲜肠黏膜投入反应锅内，按3％加入NaCl，用30％NaOH调pH＝9．0，于53～55℃保温提取2h。继续升温至95℃，维持10min，冷却至50℃以下，过滤，收集滤液。②吸附：加入714强碱性C1-型树脂，树脂用量为提取液的2％。搅拌吸附8h，静置过夜。③洗涤：收集树脂，用水冲洗至洗液澄清，滤干，用2倍量1.4mol／L NaCl搅拌2h，滤干。④洗脱：用2倍量3mol／LNaCl搅拌洗脱8h，滤干，再用1倍量3mo1／LNaCl搅拌洗脱2h，滤干。
⑤沉淀：合并滤液，加入等量95％乙醇沉淀过夜。收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥得粗品。⑥精制：粗品肝素溶于15倍量1％NaCl，用6mol／L盐酸调pH＝1.5左右，过滤至清，随即用5mol／LNaOH调pH＝11.0，按3％用量加入H2O2(浓度30％)，25℃放置。维持pH＝11.0，第2天再按1％量加入H2O2，调整pH＝11.0，继续放置，共48h，用6mol／L盐酸调pH＝6.5，加人等量的95％乙醇，沉淀过夜。收集沉淀，经丙酮脱水真空干燥，即得肝素钠精晶。
33.简述甾类激素药物的分类及其生理作用？
根据其生理活性可分为肾上腺皮质激素、性激素和蛋白同化激素三大类。
肾上腺皮质激素按其生理功能，又可分为糖皮质激素和盐皮质激素两大类。以可的松(conisonc)和氢化可的松(hydrocoritsonc)为代表的糖皮质激素是由肾上腺束状带细胞所合成和分泌，主要影响人体的糖、蛋白质和脂肪的代谢，而对水、盐的代谢作用影响较小。临床上主要用于抗炎、抗过敏等。以醛甾酮和去氧皮甾酮为代表的盐皮质激素是由肾上腺的球状带细胞所分泌，主要作用是促进钠离子由肾小管的重吸收，从而使钠的排泄量减少，促进钾的排泄。临床上主要用于治疗慢性肾上腺皮质机能减退症(阿狄森病)及低血钠症。
性激素按生理功能分为雄性激素和雌性激素两大类。性激素的重要生理功能是刺激副性器官的发育和成熟，激发副性特性的出现，增进两性生殖细胞结合和孕育能力，还有调节代谢作用。
蛋白同化激素其主要作用有：①促进蛋白质合成和抑制蛋白质异化；②加速骨组织钙化和生长；③刺激骨髓造血功能，增加红血球量；④促进组织新生和肉芽形成；⑤降低血胆甾醇。临床上用于与上述作用相应的病症。
34.试比较人工自动免疫与人工被动免疫的主要特点？
35.基因工程乙肝疫苗表达细胞有哪些？
1、重组酵母乙肝疫苗(YDV)，指在酵母表达系统表达的HBV包膜蛋白疫苗。
2、重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞乙肝疫苗，指在CHO细胞中表达的HBV包膜蛋白疫苗。该疫苗免疫原性强，抗原纯化简单，适于大规模生产。
3、c127乙肝疫苗(Hepagene)是由英国Medeva公司采用鼠c127纯系细胞株表达的一种含Pre-S1,Pre-S2及S抗原成分的新型乙肝疫苗。
36.核酸疫苗有哪些特点？
(１)免疫保护力增强：接种后蛋白质在宿主细胞内表达，直接与组织相容性复合物MHCI 或II类分子结合，同时引起细胞和体液免疫，对慢性病毒感染性疾病等依赖细胞免疫清除病原的疾病的预防更加有效。
(２)制备简单，省时省力：核酸疫苗作为一种重组质粒，易在工程菌内大量扩增，提纯方法简单，可制备多价核酸疫苗。
(３)同种异株交叉保护：这是基因疫苗的最大优点之一。在制备基因疫苗时，可通过对基因表达载体所携带的靶基因进行改造，从而选择抗原决定簇。(４)应用较安全：接种核酸疫苗后，蛋白质抗原在宿主细胞内表达，无因毒力返祖或残留毒力病毒颗粒而引发疫病的危险，也不会引起对机体的不良反应。
(５)产生持久免疫应答：免疫具有持久性，一次接种可获得长期免疫力，无需反复多次加强免疫。
(６)贮存、运输方便：核酸疫苗的质粒DNA稳定性好，无须冷藏。
(７)可用于防治肿瘤：核酸疫苗可以诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞)，CTL应答也是机体杀死癌变细胞的有效清除途径。
37.人-鼠嵌合抗体制造有几个步骤？
（1）鼠单克隆抗体可变区基因克隆（2）表达载体的构建（3）表达
38.抗生素个提取过程的要求？
1)时间短；2)温度低；3)pH宜选择对抗生素较稳定的范围；4)勤清洗消毒(包括厂房、设备、管路并注意消灭死角)。
39.青霉素生物合成的前体氨基酸有几个些？
(1)α-氨基己二酸的生物合成(2)缬氨酸的生物合成(3)半胱氨酸的生物合成
40.试举例说明青霉素的结晶。
以青霉素钾盐结晶为例说明 ：
青霉素游离酸在有机溶媒中的溶解度是很大的，但是它与某些金属或有机胺结合成盐之后，由于极性增大，溶解度大大减小而且自溶媒中析出。它和醋酸钾化学反应式如下：
41.大环内酯类抗生素的作用机理是什么？
大环内酯类作用于细菌细胞核糖蛋白体50s亚单位，阻碍细菌蛋白质合成，属于生长期抑制剂。
42.青霉素、红霉素、四环素和链霉素的结构与理化性质是什么？
43.抗生素结晶和重结晶的方法有哪些？
(1)改变温度结晶：利用抗生素在溶剂中的溶解度随温度变化而显著变化的这一特性来进行结晶。例如制霉菌素的浓缩液在5℃条件下保持4～ 6h后即结晶完全。分离掉母液、洗涤、干燥、磨粉后即得到制霉菌素成品。
(2)利用等电点结晶：当将某一抗生素溶液的pH调到等电点时，它在水溶液中溶解度最小，则沉淀析出。如6-氨基青霉烷酸(6-APA)水溶液当PH调至等电点(4.3)时，6-APA即从水溶液中沉淀析出。
(3)加成盐剂结晶：在抗生素溶液中加成盐剂(酸、碱或盐类)使抗生素以盐的形式从溶液中沉淀结品。例如在青霉素G或头孢菌素C的浓缩浓中加入醋酸钾、即生成钾盐析出。
(4)加入不同溶剂结晶：利用抗生素在不同溶剂中溶解度大小的不同，在抗生素某一溶剂的溶液中加入另一溶剂使抗生素析出。如巴龙霉素具有易溶于水而不溶于乙醇的性质。在其浓缩液中加入10～12倍体积的95%乙醇，并调PH至7.2～7.3使其结晶析出。
重结晶是进一步精制以获高纯度抗生素的有效方法。
44.什么叫抗生素滥用？抗生素滥用有何害处？
凡超时、超量、不对症使用或未严格规范使用抗生素，都属于抗生素滥用。
