第十节 血清乙型肝炎病毒前S1抗原(HBVPreS1)检测SOP(MYSOP009HBVPRS1_hbv血清型检测
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第十节 血清乙型肝炎病毒前S1抗原（HBVPreS1）检测（MY/SOP-009）
1.目的规范乙型肝炎病毒核心抗体检测试验，确保检测结果准确性和重复性。可用于临床辅助诊断是否感染乙型肝炎病毒。2.原理
应用ELISA法原理检测人血清或血浆中的乙型肝炎病毒前S1抗原，用乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）包被微孔，配以辣根过氧化物酶标记的乙型肝炎病毒前S1（PreS1）多克隆抗体，加入TMB显色液后显色，用来检测血清中的乙型肝炎病毒前S1抗原。3.标本：采集见采样手册。
3.1标本要求：用无抗凝剂管抽取静脉血2～3ml，1小时内送检，2小时内离心(2500～3000r/m)10分钟分离出血清。
3.2标本储存：一般标本应在2小时内完成检验，室温放置下不超过8小时，不能立即检测的标本应离心后4～8℃保存不超过48小时。超过48小时的标本应分离出血清于2～8℃的待检样本冰箱保存，一周内检测完毕。已完成检测的标本储存在废弃样本冰箱保存1周，以备复查。3.3 拒收的标本包括
标本量过少；放置时间过久；申请单与标本上信息不一致；检验项目与标本类型不符；输液时在同侧血管抽血；标本溶血或严重脂血；标本污染；空的试管等。4.试剂
4.1试剂名称：乙型肝炎病毒前S1抗原检测试剂盒（酶联免疫法）。4.2 生产厂家：上海复星长征医学科学有限公司。4.3 试剂组成：
包被板(96T)；酶结合物1瓶；TMB显色剂A、B各1瓶；浓缩洗涤液1瓶(1：20稀释)；终止液1瓶；阴性对照；阳性对照；子母袋；板贴。
4.4 试剂储存条件及有效期：储存温度为2～8℃，有效期为12个月，稳定期开封后的使用期限为7天（剩余包被条装入密封袋中保存）。4.5性能参数
4.5.1灵敏度：用灵敏度企业参照品（L1、L2、L3）进行检测，结果应为阳性。4.5.2 精密性：用精密性企业参考品进行检测，CV（%）
4.5.3.1 常见的干扰因素如溶血（血红素含量不高于500mg/L）、高血脂（甘油三酯含量不高于5.6mmol/L）、黄疸（胆红素含量不高于340ug/L）、类风湿因子和ALT升高均不会造成假阳性。
4.5.3.2 检测血清与三种常见的抗凝剂抗凝血浆标本，结果无差异。4.5.3.3 本试剂与HAV-IgM、HEV、HCV和HIV抗体阳性样品均无交叉反应。5.仪器设备: Anthos 2010酶标分析仪。6.操作步骤
6.1 取出试剂盒及待测样品，将所有试剂及样品恢复至室温（18-25℃）。将恒温箱调至反应温度。
6.2 编号与加样：第1孔加阳性对照50μl，第2孔加阴性对照50μl，第3孔加低值质控50μl和第4孔加高值质控50μl，第5孔开始分别按序将样本50μl加入对应微孔。（注：用双波长检测，可不设空白对照孔；）
6.3 每孔加酶标结合物各50μl,振荡30s，使孔内液体混匀，用板贴封盖反应板,置 37℃温育 60 分钟。
6.4洗涤:小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤6次,扣干。
6.5 显色:每孔加入TMB显色剂A、B各50μl,轻轻振荡混匀,置 37℃避光显色 10～15分钟。
6.6 加终止液:每孔加终止液 50μl，轻轻振荡混匀。
6.7 测定：用酶标仪双波长450nm/（620nm～630nm）测定各孔OD值。7.结果的分析与判断
7.1 CUT OFF值=阴性对照孔OD值×2.5。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算；高于0.05，按实际值计算。）
7.2 待测样品OD值＜CUT OFF值时，判为阴性。7.3 待测样品OD值≥CUT OFF值时，判为阳性。8.质量控制：
8.1 质控物来源: 上海复星长征医学科学有限公司。8.2 贮存条件和稳定期：2～8℃贮存，效期12个月。8.3 室内质量控制和外部质量评价程序：见程序性文件。9.生物参考区间：阴性。10.可报告区间：阴性～阳性。11.报告时间：
11.1平诊：门诊报告发放时限是当日下午6：00统一发放报告。病区报告发放时限是当日下午6：00由护士发放到各科室。11.2急诊：一般不报告急诊。12.注意事项
12.1 勿使用过期试剂，不同品名、不同批号的试剂不可混用，从冰箱中取出使用前必须回复至室温。
12.2取出当天所需微孔条后，其余微孔条用封口膜封存，以避免受潮。12.2加样至孔底，勿加在孔壁上，勿产生气泡；加试剂前应使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。垂直滴加。勿滴在孔壁上。12.3温育时间一定要够。
12.4洗板要充分；防溢出，防污染。
12.5拍板时应注意微孔掉落及多余液体洒溅。13．操作中可能的风险与安全措施（见第一节）14.临床意义
14.1反映HBV感染与复制状况的标准。PreS1-Ag出现较早并与HBeAg，HBV-DNA显著相关，可作为急性乙型肝炎早期感染的标志，也是反应HBV复制的指标 14.2 预后及药物疗效的判断。急性乙型肝炎患者PreS1一Ag阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象；如果PreS1一Ag持续阳性，提示将发展至慢性肝炎，且在机体免疫反应参与下，可出现肝细胞损害，其中一部分可演变为肝硬化和肝癌。
14.3早期诊断病毒感染。PreS1-Ag出现在急性乙型肝炎最早期，在转氨酶升高之前即可查出，提示可作为早期诊断乙型肝炎病毒感染。在体检和献血员中加查PreS1一Ag，对早诊断和尽早切断传染源有十分重要作用。因此前S1抗原联合乙肝五项检测，可提高乙肝病毒检出率、减少漏诊率。15.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
15.1一般使用anthos2010酶标仪，如出现故障可以用MK3酶标仪进行代替检测。15.2如仪器都出现故障，可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。16.参考文献
16.1郭葆玉，等。乙型肝炎前S1蛋白的融合表达。第二军医大学学报2000年第3期第21卷 研究简报。16.2试剂使用说明书。
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