万海霞开题报告_万靖开题报告

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青岛大学

毕业论文(设计)开题报告

题目：

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专业：

姓名：

指导教师：多管藻蛋白质酶解多肽的抗氧化活性研究医学院食品科学与工程魏玉西

2010年3月15日

开题报告

多管藻(Polysiphonia urceolata)属红藻门、松节藻科、多管藻属，藻体一般呈红色．毛须状，丛生，主要生长在潮间带礁石或经济海产品养殖架(笼)上，资源量较大。徐年君等采用高通量方法对山东沿海海藻进行活性筛选，发现多管藻的乙醇、氯仿提取物对KB 细胞或HT229 细胞具有选择抑制活性[1]；张婷等研究发现多管藻乙醇提取物对实验动物有一定抗脂质过氧化作用[2]。尤为引人注目的是多管藻蛋白质含量高达36%（以干基计）[3]，可用于研制复合氨基酸营养液[4]。但至今尚未见有关多管藻蛋白酶解多肽抗氧化活性的研究报道。本文在提取多管藻中不同溶解性蛋白质的基础上，分别采用酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶酶解，将所得酶解多肽分别进行清除HO∙和DPPH∙ 活性研究，为其在抗衰老保健食品领域的应用提供试验依据。

1.多管藻的营养及药用价值

1.1 多管藻营养成分

据吉宋海涛、范晓、许申鸿分析[3]，多管藻富含碳水化合物、蛋白质、粗纤维及矿物质，同时还含有脂肪和维生素。其中，铁、锌含量非常丰富，尤其铁元素含量是其他藻类的近前倍，而Pb、Cd等重金属含量极微，蛋白质含量可高达35%以上，且其中氨基酸种类齐全，必需氨基酸含量较高，且张立新、杭瑚、赵爱云对多管藻中氨基酸的含量进行了分析，并得到了相应数据[5]；魏玉西等研制出了多管藻复合氨基酸营养液[4]。多管藻中含有多种活性物质，且其来源丰富，因此好多人从其不同成分中提取活性物质进行科学研究，以进一步指导实践，充分挖掘和发挥多管藻在生活中的潜在价值。

1.2 多管藻的药用价值

我国海域辽阔，红藻资源相当丰富,截至2008年，中国海域已经有记载的红藻为

576种，占大型藻类物种总数的56%，分别分布于潮间带至浅海区域，保存完好的野生红藻资源宝库, 蕴藏量相当丰富[6]。然而，目前有药用价值及研究报道的红藻种类却仅占全部红藻种类的6%，九成以上的红藻种类还未被研究，因此存在着十分广阔的开发利用空间。同时，在我国已经养殖的12余种海洋药用藻类中，红藻类就有10种，人工养殖红藻密度大，产量高，但目前其开发利用还处于比较简单原始的状态，实际药用利用率很低，造成了大量药用红藻资源的浪费。

多管藻(Polysiphonia urceolata)广泛分布于我国山东沿海，曾经采用高通量方法对山东沿海海藻进行活性筛选，发现多管藻的乙醇、氯仿提取物对KB细胞或HT一29细胞具有选择抑制活性[

7、8]。柳全文、张婷、刘珂等研究发现多管藻总酚具有降血糖的作用[8],因此我们一定要利用好身边的这一资源，把它应用于实践，不论是研制成保健品还是药品，把其中的有用成分挖掘出来，应用于目前困扰无数人的高血压、高血糖的问题当中。近几年来,由于高度不饱和脂肪酸的重要生理活性如抗动脉粥样硬化(Mehta et al ,1987)、血栓(Urakaze et al ,1986)、高血脂(Phillipson et al ,1985)和高血压以及消除炎症(Robinson et al ,1986)[9]等使人们对脂化学研究产生高度重视。因为海洋藻类与陆地植物所处的环境不同，所以与陆地植物相比更富含长链高度不饱和脂肪酸；各种脂肪酸在海藻中分布的不均衡性，引起了化学分类学家极大的兴趣。经李宪璀、范晓、韩丽君等分析红藻几乎不含二十二碳高度不饱和脂肪酸，但富含二十碳PUFAs(主要是二十碳五烯酸即EPA和二十碳四烯酸即AA)。EPA含量都在30 %以上,比绿藻和褐藻高[9]。

2.多管藻及其深加工产品的开发利用

2.1 在养殖业中的利用

在世界上，以海藻粉作为水产及畜牧饲料已有几十年的历史，爱尔兰、英国、南非、印度、新西兰等国家都建立了海藻饲料专业工厂来规模化生产海藻饲料。海藻粉含有极为丰富而独特的营养物质，还含有大量生物活性物质，在水产和畜牧业中，很多试验和研究证明，海藻对动物无毒副作用，作为饲料添加剂使用，能改进明，添加海藻粉不但提高了鸡的生长速度和饲料转化率，同时产蛋率提高了60%，破壳蛋减少45%。刘永钢报道，在蛋鸡日粮中加2%~6%海藻粉，结果试验组鸡蛋的蛋白高度、哈夫单位均有所提高[10]。日本水产综合研究中心濑户内海区水产研究所与日本水产

（株）共同研究开发出饲料中添加海藻发酵产物可大幅度提高养殖水产品对病毒、细菌疾病的抵抗力之技术，在一般配合饲料中添加10%的海藻发酵物质投喂真鲷，可提高对真鲷养殖中代表性病毒病虹彩病毒病的抵抗力[11]。

2.2 在食品工业中的应用

多管藻营养丰富，富含碳水化合物、蛋白质、粗纤维及矿物质，同时还含有脂肪和维生素，因此人们将它作为原料制作成海凉粉，非常的有营养。海凉粉是青岛,大连特产的东西，原料为多管藻，制作方法为：将多管藻晒干，然后上锅熬7-8小时，再过滤、晾凉后切成条形便成海凉粉。再加上蒜泥、酱油、香油等辅料即可食用。据说海凉粉可以使肠内酶类分泌活性加强，并且可以提高清除肠内沉积废物的利用，这样就有美容养颜的作用。目前已经有商家将它制成成品于市场上销售，因此有很大的商业价值和发展前景。

3.实验材料，药品与主要仪器

3.1 材料、药品

多管藻：于2009年5月采于青岛海域并由中科院海洋所鉴定，去泥沙杂质后晒干备

用。

药品：牛血清蛋白、胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、DPPH·、邻二氮菲、硫酸铜、浓硫酸、硼酸（分析纯）、盐酸（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、七水合硫酸亚铁(分析纯)、无水乙醇(分析纯)、双氧水（分析纯、重蒸水）。

3.2 主要仪器

紫外－可见分光光度计、恒温振荡器、倾斜式高速万能粉碎机、电子天平、超声波细胞粉碎机、高速冷冻离心机研究方法

采用超声破碎、提取、酒精沉淀等步骤获得多管藻水溶性蛋白质、碱溶性蛋白质和盐溶性蛋白质，分别经胃蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶酶解处理获得相应多肽，分别采用邻二氮菲—Fe2+氧化法和DPPH·清除法评价其抗氧化活性。

5.实验计划

第1~2周：确定选题，查阅相关资料，初步设计制定项目研究方案，开题报告。第 3 周：准备实验仪器，药品，开始实验。

第4~7周：原料预处理，提取多管藻的三种蛋白质并酶解成相应的多肽。第 8~11周： 对多肽进行抗氧化活性的测定。

第12 周：整理数据，撰写毕业论文。

第13 周：修改论文，准备答辩。

主要参考文献

[1] 徐年军,范晓,韩丽君,等.山东沿海海藻抗肿瘤活性的筛选[J].海洋与湖

沼,2001,32(4):408.[2] 张婷,柳成荫,柳全文,等.多管藻提取物的抗氧化作用[J].食品科

学,2009,30(1):255.[3] 宋海涛,范晓许,申鸿.多管藻化学组成特点研究[J].海洋科学,1997,4:58-60.[4] 魏玉西,张立新,杭瑚,等.多管藻复合氨基酸营养液的研制[J].食品科

学,2001,22(2):50-53.[5] 张立新,杭瑚,赵爱云.两种多管藻中总氨基酸含量的分析[J].海洋科

学,1999,2:6-7.[6] 方玉春,王毓,罗艳,等.中国药用红藻资源调查及开发利用建议[J].中国海洋药

物杂志,2010,29(3):63-67.[7]Xu N J,Fan X,Han L J,et al.Screening marine algae from Shandong coast for

antitumor activity [J].Oceanol Limnol Sin(海洋与湖沼),2001,32(4):408-413.[8] 柳全文,张婷,刘珂,等.多管藻总酚降血糖作用研究[J].中草药,2007,38(3):415.[9] 李宪璀,范晓,韩丽君,等.中国黄、渤海常见大型海藻的脂肪酸组成[J].海洋与湖

沼,2002,33(2):215-222.[10] 魏尊,谷子林,李秋凤,等.饲料中添加海藻粉对蛋品质的影响[J].饲料研

究,2005,6:24-26.[11] 亚丁.利用发酵海藻饲料提高养殖鱼的抵抗力[J].现代渔业信

息,2006,27(7):44-45.