盐酸克伦特罗(瘦肉精)_盐酸克伦特罗事件

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综述盐酸克伦特罗的药理作用、在机体内的残留性及检测技术

摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法

瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。

1.盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用

1.1 理化性质

中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl；

图1 盐酸克伦特罗结构式

盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。1.2 药理作用

20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为 30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上 的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内 ATP转化为cAMP,后者激 活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解 喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长 因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影

响正常肌 肉和心脏,促进神经修复后肌肉功能的恢复等多种生理功能[2]。

2.盐酸克伦特罗的毒性世纪80年代初人们发现在肉用动物生产中每天使用克伦特罗1000～3000ug具有促进肌 肉发育和脂肪分解的作用,可明显提高饲料的利用率和瘦肉率,具有能量重分配的作用。其机理是高剂量克伦特罗通过作用于骨骼肌的β-2肾上腺受体,引起肌肉中环磷酸腺苷和乳酸浓度 的快速升高,肌糖元浓度下降,加快肌肉蛋白质的合成速度长期连续使用能增加肌肉体积、增加体重。对心肌和后肢肌肉影响最明显,使左心室比目鱼肌和深浅腓肠肌肌纤维显著性增大。但在猪等肉用牲畜中投喂克伦特罗,即使是屠宰前停药肝肺中仍可检出较高浓度的克伦特罗。肉中的克伦特罗可使人体出现多种毒副作用,导致体内聚胺浓度升高而继发心脏肥大。一次性摄入克伦特罗的量过大,可迅速造成心率过速,对原有心律失常的病人更易发生心脏反应，严重时可出现心肌梗死。同时,由于激活Na+质谱法

气相色谱-质谱联用法（GC/MS）可以在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性定量分析，且具有较高的灵敏度，是检测盐酸克伦特罗残留的常用的方法之一。气相色谱-质谱联用法可用于饲料、血液、组织中盐酸克伦特罗的分析，检测限为0.5μg/kg。与高效液相色谱法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，中国、欧盟及美国等国家将气相色谱-质谱联用法定为检测盐酸克伦特罗的确证性方法。

吴银良等[13]（2006）建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取-气相色谱-质谱分析方法，并且盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺的检出限分别为0.30μg/kg和1.00μg/kg。王红等[14]（2007）也简化了方法，测定了动物肝脏组织中的盐酸克伦特罗。本方法所需设备昂贵，操作繁琐，分析检测前要对分子上羟基、氨基等极性基团衍生化，难以作为常规方法应用，不能进行现场检测。

4.3 酶联免疫吸附法（ELISA）

4.3.1 酶联免疫分析

目前，检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。该方法检测下限一般1.0μg/L（尿样）、0.5μg/kg（组织）。使用该法，酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.3～1.0 ng/mL，组织为0.2～1.0 ng/mg。国内外有许多检测试剂盒，但质量不一。酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析；缺点是仍不能实现现场检测，且该法检测结果假阳性率较高，尤其当样品中含有抗生素或磺胺类药物时，会使假阳性率进一步提高[15]。

4.3.2 放射免疫分析技术

Ropitar和Zimmer首次报道用于β-2肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。Delahaut等[16]描述了建立更为特异的放射免疫方法，其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他β-2肾上腺素能激动剂的交叉反应小于10%，最低检测限可达到0.5 ng/g。目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗，检测限可达到2.4 ng/g。

放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物，存在着辐射防护及防止污染的问题，且试剂盒使用时间短，而且每次操作都要做标准曲线，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。4.4 滴金免疫技术

原理通过盐酸克伦特罗CL（或莱克多巴胺RAC）与CL-BSA（盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白）偶联物（或RAC-BSA）竞争结合抗CL（或RAC）单克隆抗体-胶体金复合物，使试纸上反应线颜色变化，以判定样品中CL（或RAC）的含量。当检样中CL（或RAC）浓度低于最低检测水平时，胶体金中的抗CL（或RAC）单抗-胶体金复合物与T线上的CL-BSA偶联物（或RAC-BSA）结合，T线呈色与C线相近：当检样中CL（或RAC）浓度大于5ng/mL 时，抗CL（或 RAC）单抗-胶体金复合物与CL（或RAC）结合，T线显色比C线浅或完全看不到线，且CL（或RAC）浓度越高T线显色越浅，从而作出判定。滴金免疫技术具有简便易行、快速、试剂安全、特异性高、可单份测定、不需要特殊仪器和设备等优点，且金标试剂比酶试剂更稳定，冷冻干燥后可长期保存，便于常规应用。4.5 时间分辨荧光免疫分析技术

时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是一种新型的超微量的非放射性标记免疫分析技术，它以镧系元素为标记物。时间分辨荧光免疫分析技术集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身，且克服了酶标记物的不稳定性、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰和电化学发光的非直接标记等缺点，降低了非特异性信号，达到了极高的信噪比，大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备方便、储存时间长、无放射性污染检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、应用范围广泛等优点。因此，越来越受到人们的关注。目前，国内外应用于盐酸克伦特罗检测的时间分辨荧光免疫分析技术的报道还较少，随着技术的越来越成熟，其应用将更广泛。如果研制成检测盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫分析技术试纸条，将可对盐酸克伦特罗的残留进行现场检测 [16]。

4.6 生物传感技术

将生物技术与微电子技术相结合，利用生物体内抗原、抗体专一性结合而导致电化学变化设计成免疫生物传感器。将CL（或RAC）抗体微型化膜固定于换能器（工作电极）表面，测定时在待测样品溶液中加入已知浓度的酶标激素，CL（或 RAC）与标记抗原竞争性地结合电极上的抗体，使经洗涤后的电极与底物溶液接触，标记酶催化底物发生相应的化学变化，转变为电信号输出，输出显示和数据处理系统将信息进行数据处理和输出，直接显示测得CL（或 RAC）的含量。

国外已有用生物传感器技术检测CLB残留的资料报道, 如 Pizzariello Andrea 应用分子印迹聚合膜（MIP）作为分子识别系统，选择固相基质复合电极（SBMCE）作为换能器，微分脉冲电压电流表（DPV）作为输出显示装置检测牛肝脏中CLB残留，结果此方法特异性强，与其他同类物质交叉反应低，缺点是反应时间较长，灵敏度还有待于提高[17]。目前酶免疫传感器的灵敏度达 0.01μg/kg，而且可在几分钟之内完成检测全过程。目前研制成功的检测盐酸克伦特罗的酶免疫传感器，检测限为0.3μg/kg，可 在10 min内完成检测全过程，且传感器体积小（15 cm×7 cm×2 cm），便于携带和实现现场检测 [18]。生物传感器具有选择性好、响应速度快、样品用量少、操作简易、价格低廉、定量准确，且其结构简单、体积小、携带和使用方便、可以实现连续的在线检测和反复使用等优点。4.7 毛细管电泳法

Gausephol 和 Blaschke（1998）应用毛细管区带电泳法检测人尿中盐酸克伦特罗的残留，最低检测限达到0.5 μg/L，而且精确度和准确度均符合生物样品中残留物的检测标准[19]。毛细管区带电泳法分离效率可达几百万理论塔板数，操作简便，快速，所需样品量极少，而且灵活性大，许多分离参数可以调节，但是所需仪器非常昂贵和复杂。

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