提质粒_大提质粒

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大肠杆菌质粒的提取

1、离心收集3ml菌体；

2、200µl溶液I悬浮菌体；

3、400µl溶液II立即混合均匀；

4、300µl溶液III混合均匀；

5、最大转速离心10分钟；

6、上清液加入1倍体积的异丙醇，沉淀2分钟，离心10分钟；

7、用70%乙醇洗涤2次；

8、干燥后加一定量的TE缓冲液溶解。

溶液I：50nM葡萄糖，25mMTris-HCl，10Mm EDTA,Ph8.0.溶液II：0.2M NaOH,1%SDS.溶液III：2.55M乙酸钾，pH4.8.