四逆散转换成丸剂的剂型研究_四逆散及其类方的研究

四逆散转换成丸剂的剂型研究由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“四逆散及其类方的研究”。

四逆散转换成丸剂的剂型研究

一、立项依据

作为中药散剂的剂型，自先秦时期至今日，变化不大，进展不快，到目前为止，散剂仍停留在粗粉、细粉的层面。煮散剂丝毫没有得到发展，医院皮外科、骨科使用的内部协定处方(中药轧成粗散，用于熏洗)也大为减少；儿科常用的小儿牛黄散、救急散等在医院也备受冷落。就目前的加工状况而言，似乎过于单一，以市场所供应的品种看，大多只是将符合炮制规范的药材按处方配量，再依据产品工艺加工，分装、贴签、装箱。而超微细的、更适合人体吸收的品种少有，取代于散剂的品种也甚微，近年上市的中药免煎剂使用受阻，也引发争议，人们置疑疗效和药物在煎煮过程中所发生变化的消失[1]。散剂剂量大，药物粉碎后比表面较大，嗅味、刺激性、吸湿性及化学活动性等也相应地增加，使部分药物易起变化，挥发性成分易散失，容易吸收，起效较快，但容易吸湿变质，需要密闭贮存。丸剂的药物有效利用率高、释药缓慢、作用持久，服用和携带方便，能借助于包衣掩盖药物的不良气味，常作为慢性病的治疗及调和气血之用，能延缓毒剧刺激性药物的被吸收，减少毒副作用，生产技术和设备较简单[2]。

四逆散是《伤寒论》中的名方，由柴胡、芍药、枳实、甘草4味药捣细为散，由米汤送服，功用是疏肝解郁、行气理脾。其主治有二，其一是阳郁厥逆证，症见手足不温，或腹痛，或泄利下重、脉弦；其二是肝脾气郁证，症见胁肋胀闷、脘腹疼痛、脉弦。四逆散方中柴胡配芍药疏肝解郁、调和肝脾、柔肝止痛；枳实行气导滞，配芍药行气止痛之功大增；甘草健脾、调和药性。本方没有用大量药物刻意补脾，说明脾虚现象并不严重，用米汤送服是缓和而有效的健脾和胃之法

[3]。

《伤寒论》原书主治:“少阴病，四逆，其人或咳，或悸，或小便不利，或腹中疼，或泄利下重者。”后世医家应用四逆散，在遵从原书的基础之上，并有所发挥。如《普济方》卷197:“疟疾泻痢并作者。”《类证活人书·卷四》:“大抵肾伤寒，亦多表中无热，但苦烦馈，默默而极，不欲见光明，有时腹痛，其脉沉细，旧用四顺汤，古人恨其热不堪用云。肾病而休犹有热者，可服仲景四逆散。”《景岳全书·古方八阵》卷56:“用本方积实改积壳，治阳气亢极，血脉不通，四肢厥逆，在臂胫之下者。”《类聚方广义》:“四逆散，治痢疾，累日下利不止，胸胁苦满，心下痞塞，腹中结实而痛，里急后重者。”《伤寒舌鉴·白苔舌总论》:“病四五日，未经发汗，邪热渐深，少有微渴，过饮生冷，停积胸中，营热胃冷，故令发热烦躁，四肢逆冷，而苔白干厚，满口白屑，宜四逆散加干姜”。《续名医类案》:“蜀孝廉阮太和，病寓吴山下。召诊，披衣强座，对语甚庄，神气则内索也。身热进退，舌苔黄而厚。盖自吴门受寒，以肉羹为补，而时嚷之，遂绅绵匝月。卢用疏散轻剂，热退。又复强吠，再热不能起坐。越五日诊之，澹妄呼笑，不识人，己三日，形骨立，汗雨下，而内热特甚，胸胁之热，扣之烙手，第脉尚

有神，乃用人参八钱，加四逆散中，一剂而澹妄宁，三剂而热邪清矣。”再如《王旭高临证医案·脱腹痛门》所载验案:“腹痛三年，时作时止，寒在中焦，当与温化无疑。然脉小弦滑，必有宿积。前用温下，温通两法，病虽减而未定。据云每交午月其痛倍甚，则兼湿热，故脉浮小而沉大，按之有力，此为阴中伏阳也。当利少阴之枢，温厥阴之气，运太阴之滞，更参滑以去着法。柴胡、白芍、积实、甘草、吴茱英、获荃、木香、白术。”《餐英馆疗治杂话》:“心下常痞，两胁下如立筒吹火，胀而凝，左胁尤甚。心下凝结，胸中痞满，郁郁不快，遇事善怒。或肩背胀，„„此等肝郁之候，宜用此方(即四逆散)。”从以上可以看出，古人运用四逆散已经积累了较为丰富的经验，病证涉及多个方面，诸如疟疾、肾伤寒、痢疾、四肢厥逆、发热、腹痛、胁胀等。四逆散是疏肝理脾，调理气机的基本方。现代临床广泛应用于内、外、妇、儿、男各科，辨证使用均获良好疗效。其病症涉及虽广，但基本病机大体一致，总离不开“肝郁”这个中心，只要抓住这个中心，便可执简驭繁，正所谓“调肝即可治百病” [4]。具体如，1.冠心病合并早搏：王氏等用四逆散加味治疗难治性早搏32例，病程最长10年，最短1个月;其中高血压2例，冠心病4例，肺心病2例，心肌炎8例，发病原因不明者16例;早搏次数为9-20次/分.部分病例出现二联律、三联律，心率在65-140次/分之间。药用:柴胡、炙甘草、人参、麦冬、桂枝、延胡索各109，赤白芍、阿胶(洋化)各129，积壳69。15天为1个疗程。经治l个疗程后，临床治愈12例，好转6例;2个疗程临床治愈6例，好转2例;3个疗程临床治愈4例，无效2例，总有效率为93.75%。所有病例随访半年，仅2例肺心病患者复发1次，其余病例均无复发。2.慢性胆班炎、胃炎、胆道功能紊乱、消化性溃疡：逆散是治疗肝胆郁滞、气行不畅的基础方剂，目前已广泛用于慢性胆囊炎的治疗.并取得较好疗效。江氏等对54例慢性胆囊炎并慢性胃炎患者用四逆散加郁金、金钱草、佛手为基本方治疗，其中伴胆汁返流者32例，合并胃演疡者4例，十二指肠演疡者6例，十二指肠炎者10例，返流性食管炎者2例。疗程为6~8个月，疗程结束后复查B超和纤维胃镜。结果:慢性胃炎总有效率为94.6%，慢性胆囊炎总有效率为94%。周氏朗等，以四逆散加厚朴、石解、麦冬为基本方治疗消化性溃疡70例。其中十二指肠溃疡33例，胃溃疡22例，复合性溃疡9例，食管溃疡7例，幽门溃疡2例。服用l个疗程后，痊愈63例，有效2例，无效5例，总有效率93%。3.慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化：慢性肝炎属中医“肝着”、“胁痛”、“肝郁”、“微瘦”等范畴。基本病机为肝郁脾虚、血痕阻络。活血化癖类方药治疗肝炎、肝纤维化已在临床和动物实验中得到验证，并取得一定疗效.近年来，大量的实验和临床研究表明，四逆散为主方具有疏肝理脾、活血祛寮、补气健脾等作用。廖氏川等运用复方四逆散为基础上加用黄蔑、丹参、山植、蒲公英.制成散剂，每次59，l日3次，饭后开水冲服，30天为1个疗程。治疗43例慢性活动性乙型肝炎，结果:痊愈20例，好转15例.无效8例.总有效率为81.4%。彭氏[l0〕等运用加味四逆散治疗慢性病毒性乙型肝炎患者63例，精果临床治愈(临床症状消失，肝功能

恢复正常)37例;有效(临床症状消失或减轻，肝功能基本恢复正常)22例;无效(症状和肝功能无明显改善)4例，总有效率为93%。另据报道，四逆散加减治疗顽固性咳嗽、哮喘、胆道姻虫症、习惯性便秘等均有良效。对妇科疾病，如痛经、乳腺增生、乳房胀痛、输卵管炎性阻塞，男科疾病阳萎等效果尤为明显[5]。

畅洪昇等[6]采用慢性应激大鼠模型,运用高效液相—电化学等方法,进一步研究了四逆散活性成分对大鼠行为学和脑内神经递质的影响，证明了四逆散活性成分具有抗抑郁作用，且调节5-HT、DA神经递质是四逆散活性成分抗抑郁机制之一。

金艳等[7] 采用慢性不可预知和慢性温和应激相结合的方法造成反复心理应激的抑郁症大鼠模型,观察应激大鼠大脑皮层与海马5-羟色胺1A受体(5-HT1A)mR-NA表达的变化及四逆散活性成分的影响, 结果发现慢性应激所造成的抑郁症模型大鼠海马与皮层5-HT1A受体mRNA表达数量明显下降(P

四逆散做为《伤寒论》的著名方剂,主治伤寒邪入少阳,少阳枢机不利病证。其临床表现主要是恶寒发热,胁肋脘腹痞满,恶心呕吐,腹痛下利,四肢欠温,脉弦数。方剂的主要功效是疏透外邪,退热,调理气机,调和肠胃,止痛消炎[8]。四逆散方证的病因病机有热邪为患、阳气内郁、脾胃不和、阳虚寒盛等。关于四逆散的主要症状,原文318条中明确提出的症状只有“四逆”,其余均是或然症状。尤在径云:“四逆者,因其所治之病而命之名耳”。高学山也认为“此条重在四逆一症”。喻嘉言赞同方有执的观点,明确提出“然虽四逆而不至于厥,其热未深,故主此方为和解”,认为本证之“四逆”未至“厥”的程度。柯琴更有所阐发:“条中无主证,而皆是或然证,四逆下必有缺文。今以泄利下重四字,移至四逆下,则本方乃有纲目”。今人张胜忠认为四逆散乃为病久正虚邪陷之下利腹痛而设[9]。四逆证属缓证,宜缓治,慢慢调理,而散剂容易吸收，起效较快,不能在体内停留较长时间。丸剂，“丸者,缓也,不能速去之,其用药之舒缓而治之意也”。一方面,与煎剂、散剂等比较,传统丸剂内服后在胃肠道中溶散缓慢,发挥药效迟缓,但作用持久,故多用于慢性病的治疗。从另一个角度讲,“丸者,缓也”同时也是指传统丸剂的一种使用原则和方法,可以理解为丸剂宜从缓而用[10]。故将四逆散改换剂型为丸剂，加强其在体内停留的时间，提高其疗效。

二、活性成分检测方法的确定

王隶书等[11] 利用HPLC法,water ODS C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(40∶65)为流动相,检测波长为230 nm，测定芍药苷 的含量，结果表明芍药苷线性范围为0.3~1.8μg,平均回收率99.4%,RSD为1.77%。得到结论:方法可靠,简单可行,为控制内在质量提供了科学依据。

张嘉乐等[12] 在温度30℃时用Kromasil C18柱,以甲醇-水(21∶79)为流动相,检测波长为230 nm ,采取RP-HPLC法测定芍药苷的含量。结果得到芍药苷在0.2032~1.016μg内呈良好线性关系,r=0.999 8,平均加样回收率为100.4%,RSD=1.4%(n=5)。

刘友平等[13] 采用薄层色谱法对四逆散颗粒制剂中柴胡、白芍、枳实、甘草进行了定性鉴别;采用反相高效液相色谱法对制剂中白芍所含芍药甙进行了含量测定。该方法简便,专属性及重现性好,平均回收率为102.81%,RSD为1.06%(n=5)。TLC定性鉴别柴胡、白芍、枳实、甘草, 根据柴胡、白芍、枳实、甘草中所含化学成分理化性质不同,分别采用不同的提取和薄层色谱方法进行鉴别,结果满意。以辛弗林鉴别制剂中枳实时,显色剂茚三酮溶液应新鲜配制,显色效果以浸板为好。含白芍的中药复方制剂中芍药甙的含量测定,已报道有采用双波长薄层扫描法和高效液相色谱法等。曾采用薄层色谱鉴别项下白芍的薄层色谱条件,对芍药甙进行双波长薄层扫描测定,但其前处理复杂,影响因素较多而导致结果重现性差,采用高效液相色谱对其进行含量测定,操作简便、快速、灵敏、重现性好。

三、制备工艺

郭际[14] 通过对四逆散水煎剂的工艺条件的考察，以浸膏量和芍药昔含量为指标进行正交试验，得到了最佳煎煮工艺为加8倍量水，煎煮1.5小时，煎煮3次。用大孔吸附树脂对四逆散全方煎煮液进行富集和纯化，且对精制前后的成分进行了薄层色谱定性鉴别研究，测定了精制前后芍药昔的含量，进行了精制前后对胃肠运动影响的药效学对比。结果表明，对四逆散全方煎剂的富集和纯化，运用D141A大孔吸附树脂，其最大吸附量为1:3.2，即1g树脂吸附3.2mg指标性成分。确定了以60%的乙醇为洗脱剂，且确定洗脱剂与芍药昔含量为0.0725mg/ml的四逆散药液的体积用量比为3:1。此外，还发现，低浓度的盐溶液会降低大孔吸附树脂的吸附量，温度升高亦会降低其吸附量。对四逆散中柴胡、积实的挥发性成分进行了水蒸汽蒸馏和超临界提取，利用GC-MS进行了成分分析和比较，其中对积实的GC-MS分析尚属首次。结果表明，水蒸气蒸馏法提取的积实挥发油中鉴定出38个主要成分，占挥发油组分的90%以上，主要成分为小分子的烯类、砧类、酚类和醇类;超临界萃取的积实低极性成分中鉴定出26个主要成分，占低极性组分的43%以上。水蒸气蒸馏法和超临界萃取测定柴胡挥发油成分比较发现，鉴别峰的数量相对较少，水蒸汽蒸馏法提取的柴胡挥发油中鉴定出13个主要成分，占挥发油组分的18%以上，主要成分为百里基甲基醚、β-蛇床烯等;超临界萃取的柴胡低极性成分中鉴定出9个主要成分，占低极性组分的20%以上。主要成分为D-竺烯、3-蒈烯等。

李春成等[15]采用正交试验优选了复方四逆散的最佳提取工艺,并对其HPLC含量测定方法进行了研究,运用L9(34)正交试验设计法进行实验。通过在甲醇-水中加入醋酸和减尾剂三氟乙酸作为流动相,经对流动相的比例及流速进行反复筛选,最后确定本法的色谱条件。在该色谱条件下测定,分离度、拖尾因子及理论塔板数,均符合《中国药典》标准。将供试品用稀乙醇进行超声提取,分别在20, 30, 40，50, 60 min进行考察,结果表明提取时间为50 min,可将芍药苷提取完全。

杨星昊等[16] 应用大孔吸附树脂纯化四逆散的水煎液, 从主要成分含量、指纹图谱、总固形物得率、除杂试验等多角度不同层次比较分析不同纯化产物与活性部位成分群的相似度和纯化效果,以期得到与活性部位成分组成相似的纯化产物。结果表明HP20大孔吸附树脂的乙醇洗脱液具有与活性部位相似的成分组成，从而得出结论:HP20大孔吸附树脂对该复方的活性成分分离效果好,吸附容量大,易洗脱。

李春成[17]采用系统溶剂法，结合小鼠小肠内容物推进试验，筛选出正丁醇部位对动物肠道运动具有显著的调节作用。建立了指标性成分RP-HPLC含量测定及TLC鉴别方法，并以固形物得率、正丁醇部位重量和指标性成分含量为指标采用正交设计L9(34)优化了复方四逆散的提取条件。研究比较了多种分离纯化方法，醇沉法、超滤法、澄清剂法、大孔树脂法，主要成分含量、指纹图谱、总固形物得率、除杂试验等多角度不同层次比较分不同纯化产物与正丁醇部位成分群的相似度和纯化效果，筛选出HP20大孔吸附树脂具有良好的纯化效果，其纯化分离的工艺条件为:上样浓度为5ml/g，吸附流速为3ml/min，洗脱剂为50%乙醇，洗脱剂用量为8倍量树脂体积，洗脱速为2ml/min。分离了中药复方四逆散的活性部位(固形物得率:3.5%)，并初步进行了药效学验证，建立了活性部位的HPLC指纹图谱，采用TLC法对活性部位中主要组成药味进行了定性鉴别，有助于质量控制及评价。

刘海等[18]采用醇沉、陶瓷膜超滤、大孔树脂吸附3种方法精制四逆散水提液,以4种有效成分保留率等为指标,对各方法精制效果进行对比.超滤法对柴胡皂苷a(87.29%)保留效果较好,醇沉法保留芍药苷(85.04%)和柚皮苷(93.52%)优势明显,大孔树脂吸附法则能很好地保留柴胡皂苷a(88.14%)和柚皮苷(85.57%),同时此法可以显著降低固形物得率,各有效成分在精制物中含量较高.在四逆散精制方法研究过程中应该全面考虑各类有效成分含量的变化。

四、质量标准的建立

刘大伟等[19] 为了建立以高效液相色谱法测定四逆散中芍药苷的含量测定方法,采用方法为：C18柱，流动相为乙腈-水(18∶82)，检测波长为230nm，流速为1.0 ml/min，柱温:40℃。结果芍药苷进样量在0.672μg～0.168μg范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均加样回收率为102.0%(RSD=1.0%)。结论可得本方法简便、快速、准确、重现性好，可用于四逆散中芍药苷的含量测定。选定色谱条件（色谱柱为Diamonsil C18 5μm(200 mm×4.6 mm)色谱柱;流动相为乙腈-水(18∶82);检测波长为230nm;流速为1.0 ml/min;进样量为10μl。柱温:40℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000），进行线性关系与考察（取芍药苷对照品约15 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用稀乙醇分别制成每1 ml含67.2μg、44.8μg、33.6μg、22.4μg、16.8μg的对照品溶液，精密吸取上述溶液各10μl，在上述色谱条件下，分别进样5次，记录色

谱图，以浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，计算线性回归方程:Y=1734801.8X-5744.4，r=0.9999结果表明芍药苷在0.672～0.168μg范围内呈良好的线性关系）；精密度考察（精密吸取芍药苷对照品溶液10μl，按上述色谱条件，重复进样5次，测定其峰面积值，结果峰面积的RSD为0.3%，表明测定方法的精密度良好）；重现性考察（取同一批号的样品，照供试液制备方法平行制备5份供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积。结果含量的RSD为0.5%，表明测定方法的重复性良好）。

张美雯等[20]采用薄层鉴别柴胡、枳实、芍药、甘草。鉴别白芍中,曾试用本文所述薄层展开条件下展开,结果供试品中芍药苷蓝紫色斑点被紧靠着的其它斑点重叠了一半,改用2次展开后,供试品中的芍药苷蓝紫色分离效果满意。在枳壳鉴别中,曾试用橙皮苷对照品,用醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展开剂展开3 cm,取出,晾干后,再用甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(1∶10∶1∶1)的上层溶液展开8 cm,结果供试品色谱中,在与对照品相应的位置上所显荧光斑点重视性差,且Rf值较小。在薄层鉴别柴胡中,曾采用2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液显色,结果供试品溶液色谱中斑点显色不明显,后改用5%香草醛硫酸溶液显色,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝灰色清晰斑点,效果满意。

五、稳定性考察

刘大伟等[19] 稳定性考察，取芍药苷供试品溶液，于配制后第0、1、2、3、4小时分别进样测定，记录峰面积，峰面积的RSD为0.6%。结果表明该溶液在4 h内几乎无变化，可满足实验的要求。

根据药品质量标准，对四逆散制成丸剂进行稳定性考察，采用薄层色谱鉴别和显微鉴别,结合水分、装量、溶散时限及微生物限度等检测,进行长期稳定性试验。检查：应符合丸剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005版一部附录ⅠA)。水分：照水分测定法(《中国药典》2005版一部附录IX H)测定,蜜丸水分不得过15·0%。装量差异：取供试品10瓶,分别称定重量,每瓶装量与标示装量相比较,按装量差异限度±4%的规定,超出重量差异限度的不得多于2瓶,并不得有1份超出限度的1倍。溶散时限：照崩解时限检查法《(中国药典》2005版一部附录XIIA)片剂项下的方法加挡板进行检查,小蜜丸应在1小时内全部溶散。微生物限度标准应符合微生物限度检查法项下有关的各项规定(《中国药典》2005版一部附录XIIIC)：细菌数 每1g不得过10000个(丸剂每1g不得过30000个)，每1ml不得过500个；霉菌和酵母菌数 每1g或1ml不得过100个；大肠埃希菌 每1g或1ml不得检出；大肠菌群 每1g应小于100个。每1ml应小于10个。稳定性考察：将丸剂成品装入固体药用高密度聚乙烯塑料瓶中，按《中国药典》2005版二部附录XIX C药物稳定性试验指导原则中长期试验的要求,放置于相对湿度为60%±10%的密封玻璃器皿中,再放入温度为25℃±2℃的恒温培养箱中,于0月, 3月, 6月, 9月,12月, 18月, 24月,分别取样进行各项指标的检查。结果得到该制剂稳定[21]。

参考文献

[1] 彭正发，李志琴，彭琳.传统中药散剂的现状与前景论[J].首都医药,2006.04.01 [2] 蒋培华，史小华.丸剂的历史、现状与改革[J]上海中医药杂志, 1988:02 [3] 杨桢，高琳.举重若轻四逆散[J].中国医药报, 2010.5.18(B05)[4] 张福华，四逆散及其类方的研究[D].山东中医药大学2005 [5] 张绪富，赵进军.四逆散临床应用及其相关实验研究进展[J].湖北中医杂志, 2002,(07)[6] 畅洪昇，王庆国，石任兵，金艳.四逆散活性成分对抑郁症大鼠慢性应激模型行为学及脑内单胺类神经递质的影响[J].北京中医药大学学报, 2003,(05)[7] 金艳, 王庆国, 石任兵, 畅洪昇, 司银楚.四逆散活性成分对慢性应激诱导的抑郁症模型大鼠大脑皮层与海马5-HT_(1A)受体mRNA表达的影响[J].北京中医药大学学报, 2004,(04)

[8] 年利.四逆散方证探讨——兼与《方剂学》规划教材商榷 [J].天津中医学院学报.1998,(03)[9] 谷松.四逆散方证相关理论问题的研究[J].中医药学刊.2006.(24.1)[10] 李学林, 刘瑞新.试论“丸者,缓也”[J].中国药房, 2008,(24)[11] 王隶书，严玉清，程东岩.妇炎康复胶囊中芍药苷的HPLC测定[J].中国药师, 2004,(09)[12] 张嘉乐,黄牧,丁野.RP-HPLC法测定四物膏中芍药苷的含量[J].中国药师, 2004,(05)[13] 刘友平,张磊,张光华,彭成,王再谟,王国华.四逆散颗粒质量标准的研究[J].成都中医药大学学报.1998.(01)[14] 郭际.四逆散有效成分提取和成分分析研究[D].成都中医药大学, 2002 [15] 李春成,杨星昊,任 勇.复方四逆散的提取工艺及其含量测定方法研究[J].山东中医杂志.2004.(6).[16] 李春成，杨星昊，崔敬浩，王燕飞，朱 佳.大孔吸附树脂分离纯化四逆散活性部位的研究[J].中成药.2005.(1).[17] 李春成.复方四逆散活性部位分离纯化的研究[D].南京师范大学,2005,(02)[18] 刘海,杨星昊,訾鹏,刘飞,匡惠芬.不同精制方法对四逆散中4种有效成分含量的影响[J].南京师大学报.2007.(3).[19] 刘大伟，廖少华，肖林林，杨小玲，温琰.四逆散质量标准的研究[J].中国现代药物应用.2010.(16).[20] 张美雯,黄仙梅.四逆散质量标准研究[J].江西中医学院学报.2005.(6)[21] 李小红，张海英.骨质增生丸的稳定性考察[J].中华民族民间医药.2010