CCK8注意事项与常见问题_常见问题注意事项

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CCK-8试剂操作注意事项

1、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间或增加细胞数量（～105个细胞/孔）。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于悬浮细胞，在培养1-4小时后，可先从培养箱中取出，目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色困难，可将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。染色的最佳时间可定为悬浮细胞的最佳培养时间。对于贴壁细胞，培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出目察染色程度（根据细胞种类而定，需要摸索一下条件）。

2、注意不要将气泡带到孔内，否则会干扰观察读数。

3、96孔板在培养箱中，由于湿度不够，而培养箱由于具有一定的温度，使得边缘的孔水分蒸发较快，导致培养基中各种成分浓度变化增大，导致细胞状态不同。对于这种现象，要保证培养箱中的湿度，减少开关培养箱的次数和时间。

4、注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接几个就要再混匀一下。

5、为了减少误差，培养板的四边孔只加培养基或只接种细胞，而不作为指标检测孔。

6、建议采用多枪头的移液器，可以减少平行孔中的差异。

7、在用移液器加 CCK-8试剂时，速度要快，减少试剂在移液器上的残留。

8、为使CCK-8试剂和培养基充分混匀，建议在加入CCK-8试剂后轻轻振摇培养板。

9、若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加CCK-8试剂。

10、为了避免加样时由于CCK-8试剂在枪头上的残留所带来的误差，可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。

计算抑制率公式：（对照-给药）/（对照-本底）*100%.对照：加细胞、培养液、加溶解药物的介质、CCK-8

给药：加细胞、培养液、不同浓度的药物、CCK-8

本底：只加培养基、CCK-8