猪源TTV论文：猪源TTV ORF 荧光定量PCR 多克隆抗体_克隆猪荧光

猪源TTV论文：猪源TTV ORF 荧光定量PCR 多克隆抗体由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“克隆猪荧光”。

猪源TTV论文：猪源TTV转录本的鉴定及荧光定量PCR检测方法的建立

【中文摘要】TTV(Torque teno virus)属于环病毒科指环病毒属成员,为单股、环状、负链的DNA病毒,正20面体对称结构,无囊膜。人源TTV基因组大小约为3900bp,猪源TTV约2700bp。到目前为止,尚未发现猪源TTV与任何一种猪病有必然联系,但是与一些猪病的发生有一定的相关性,如断奶猪多系统衰竭综合症、猪皮炎肾炎综合症等,因此,研究猪源TTV对于预防其潜在的致病性有重要意义。

1、由于还没有找到适合在体外培养TTV的细胞系,其基因组结构及复制转录机制尚不清楚。本研究利用本实验室构建的含有TTV2基因组三种不同拷贝数的质粒pSK+1TTV2(含有1个TTV2基因组拷贝的pSK载体)、pSK+1.3TTV2(含有1.3个TTV2基因组拷贝的pSK载体)、pSK+2TTV2(含有2个TTV2基因组拷贝的pSK载体),将其转染至张氏肝细胞,48小时后,提取总的RNA,用DpnI消化其中可能存在的DNA,然后利用预测的阅读框ORF1、ORF2、ORF3的扩增引物,确证其中的DNA已经消除干净。RNA经反转录后,用这三对引物扩增基因片段,经克隆和测序,结果发现:ORF1确实发生了转录,但转录产物并非O...【英文摘要】TTV(Torque teno virus), a small, non-enveloped virus, has a single-stranded circular DNA genome and is currently claified into the family Anelloviridae.Viral DNA of both porcine TTV species(TTV1 and TTV2)has a high

prevalence in both healthy ans diseased pigs worldwide and multiple infection of porcine TTV species with distinct genotypes or subtypes of the same species has been documented in China.Human TTV genome has 3900bp and porcine TTV 2700bp.So far, no porcine diseases have been found a reason...【关键词】猪源TTV ORF 荧光定量PCR 多克隆抗体

【英文关键词】porcine TTV ORF fluorescence quantitative PCR polyclonal antibody 【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发

【目录】猪源TTV转录本的鉴定及荧光定量PCR检测方法的建立摘要6-817-29

Abstract8-9

第一章 绪论

1.2 人TTV 的研

1.2.2 1.1 TTV 的发现及概况17-19究进展19-251.2.1 人TTV 流行情况的调查19人TTV 的分子生物学特征19-242

41.2.3 人TTV 的致病性

1.3 猪源TTV 研1.2.4 人TTV 感染的诊断24-25究现状25-272

51.3.1 猪源TTV 的流行病学调查

1.3.3 猪源TTV 1.3.2 猪源TTV 的基因型25-26

26的分子生物学特征26-27

1.3.4 猪源TTV 的致病性

1.3.6 TTV 研究第二章 猪源TTV

2.1.1 质1.3.5 猪源TTV 的检测方法

1.4 目的和意义的前景展望2727-29转录本的鉴定29-472.1 材料与方法29-37

粒、菌株和细胞2929-3030

2.1.2 试验试剂和主要仪器设备2.1.3 CaCl_2 法制备大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞2.1.4 阳性质粒转化至DH5α感受态细胞30

312.1.6 阳性质粒的酶切鉴定

2.1.8 阳性质粒转

2.1.5 小量制备阳性质粒312.1.7 大量制备阳性质粒31-33

33-3

42.1.9 提取总染至张氏肝细胞系RNA34-3535段362.1.10 总RNA 中残余DNA 的检测

2.1.12 PCR 扩增目的基因片

2.1.14 目的基因2.2.1 含TTV2 2.1.11 反转录35-362.1.13 PCR 产物的回收36-37

2.2 结果37-45片段的克隆与测序FJ2 基因组不同拷贝数的三种质粒的酶切鉴定结果37-382.2.2 含TTV2 FJ2 基因组不同拷贝数的三种质粒的大

2.2.3 总RNA 反转录后目的基因的扩增结

2.3 讨论量抽提结果38-39果39-4145-4747-614747-48482.2.4 测序结果分析41-45第三章 猪源TTV2 ORF1 和ORF2 的多克隆抗体制备3.1 材料与方法47-543.1.2 试剂与仪器47

3.1.1 质粒、菌株与载体3.1.3 实验动物3.1.4 TSS 法制备BL21(DE3)pLysS 感受态细胞3.1.5 ORF1 全长的体外表达48-49

3.1.6 ORF1 的3.1.7 B 细胞表位富集区和ORF2 全长的体外表达49-53ORF1a 和ORF2 的多克隆抗体的制备53-54ORF2 多克隆抗体的ELISA 效价测定54

3.1.8 ORF1a 和3.2 结果

54-593.2.1 ORF1 的抗原性分析结果54-553.2.2 ORF1a 和ORF2 基因的PCR 扩增5555-5656-5959

3.2.3 重组质粒的鉴定3.2.4 ORF1a 和ORF2 重组蛋白的表达与纯化3.2.5 ORF1a 和ORF2 多克隆抗体的ELISA 效价测定3.3 讨论59-61

第四章 猪源TTV 荧光定量PCR 检4.1 材料与方法61-644.1.2 试剂和仪器61-62

4.1.1 病4.1.3 引物

4.1.5 测方法的建立61-69料与核酸样品61和探针设计62阳性标准模板的制备63636464-65验结果67结果67-6869-7081

4.1.4 病毒基因组DNA 的提取6262-63

4.1.6 标准曲线的绘制

4.1.8 敏感性试验4.1.7 特异性试验634.1.9 重复性试验63-644.2 结果64-68

4.1.10 病料的的检测

4.2.1 标准曲线的建立

4.2.3 敏感性试4.2.5 样品检测4.2.2 特异性试验结果65-674.2.4 重复性试验结果4.3 讨论68-69参考文献70-80

第五章 全文结论 致谢80-81

作者简历