鸡新城疫疫苗研究进展_鸡新城疫研究进展
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鸡新城疫疫苗研究进展
摘要：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种烈性病毒性传染病,是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一,也是我国所有鸡病中危害最大的一种,被国际兽疫局列为A类传染病。新城疫常呈败血症,主要特征是呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、黏膜和粘膜出血。该病发病急、致死率高,对养禽业的发展构成严重的威胁。新城疫病毒只有一个血清型,但不同亚群和毒株在毒力、抗原性和致病性等方面存在着明显的差异。这种差异虽然不足于造成免疫失败,但有可能使一些致病毒株在免疫鸡群持续存在。目前,鸡新城疫尚无有效治疗药物，但在长期兽医临床实践中，发现用中兽医治疗有明显的效果，这对鸡新城疫疫苗研究有新的进展。
关键词：鸡新城疫传染病中兽医进展
新城疫病毒基因组为一条负链不分节段的NA单个分子,由15186个核苷酸组成,包含6基因,由3′到5′的顺序依次为NP-P-M-F-H-L,分别编码核衣壳蛋白(NP)、磷酸化的核衣相联蛋白(P)、基质蛋白(M)、血凝素神经氨酸酶(N)、融合蛋白(F)、RNA依赖的RNA聚合酶等6种病毒特异性结构蛋白。HN蛋白与F蛋白是重要的宿主保护性抗原,其中F蛋白是决定病毒毒力的主要因素,其次是HN蛋白,HN蛋白和F蛋白在决定病毒毒力方面关系密切。有强毒株和弱毒株两类。病毒分为低毒力型（即缓发型）、中等毒力型（即中发型）、强毒力型（即速发型）3型。多数高强度毒力株常属嗜内脏型新城疫病毒。
1、新城疫病原
鸡新城疫病毒（NDV）属于副粘病毒科腮腺炎病毒属。但近年来对基因组长序列的测定表明，NDV以及其他禽副黏病毒（APMV）与腮腺炎病毒属中的其他病毒之间的差别，足以把它们列为一个单独的属。BDV完整病毒料子近圆形，有囊膜，在囊膜的外层有呈放射状排列的纤突，能刺激宿主产生抑制病毒凝集红细胞的抗体和病毒中和抗体。
根据不同毒力毒株感染鸡表现的不同，可将NDV分为几种致病型：（1）速发型或强毒型毒株，在各种年龄易感染鸡引起急性致死性感染（2）中发型或中毒弄毒株，公在易感染的幼龄鸡造成致死性感染（3）缓发型即低毒型或无毒型毒株，表现为轻微的呼吸道感染或无临诊症状肠道感染。NDV的毒力分型必须进行生物学试验，即依据鸡胚平均死亡的时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉接种致病指数（IVPI）来区别。
NDV的一个很重要的生物学特性就是能吸附于鸡及某些哺乳动物或人的红细胞表面，并引起红细胞凝集（HA），这种特性与病毒囊膜上纤突所含血凝素和神经氨酸酶有关。其血凝现象能被抗NDV的抗体所抑制（HI），因此可用HA和HI试验来鉴定病毒，进行免疫监测和浒病学的调查。
2、新城疫疫苗的研究及中药防治
目前已知主要的新城疫疫苗有基因工程苗、弱毒活疫苗、灭活疫苗、联苗等。
2、1 基因工程苗
基因工程苗是目前疫苗研究的热点，国内外一些实验室从20 世纪80年代末开始利用重组DNA 技术研制ND 基因工程疫苗。目前，ND 基因工程苗主要有DNA 疫苗、亚单位苗、活载
体疫苗、多肽苗和转基因植物疫苗等几种。DNA 疫苗具有能够激发机体体液免疫和细胞免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点。亚单位苗是将NDV 保护性抗原基因在原核或真核系统中表达所获得的产品制成的疫苗，具有安全性高，稳定性好，便于保存运输，易于批量生产的优点。活载体疫苗的载体病毒或细菌表达目标抗原可以最大限度地不受接种动物体内新城疫抗体的干扰。转基因植物疫苗的效果好，成本低、疫苗的植载体易于保存，使用方便，市场潜力巨大，发展前景十分广阔。目前，ND的基因工程苗主要有以下几种：
2．1．1 DNA疫苗
DNA疫苗是二十世纪九十年代从基因治疗领域发展起来的一种全新的疫苗，具有能够激发机体体液免疫和细胞免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点。新城疫病毒的F和HN蛋白基因均是新城疫病毒的保护性抗原基因。新城疫DNA疫苗将病毒HN或F基因通过表达质粒DNA导入机体细胞，借助宿主细胞表达系统表达病毒NA或F蛋白，诱发机体产生针对这些抗原的特异性免疫发应。
2．1．2 亚单位苗
亚单位苗是将NDV保护性抗原基因在原核或真核系统中表达所获得的产品制成的疫苗，即利用重组DNA 技术在高效表达系统表达NDV 免疫原性基因, 并辅以佐剂而制成的疫苗，这种疫苗具有安全性高，稳定性好，便于保存运输，易于批量生产的优点。
2．1．3 活载体疫苗
虽然DNA疫苗和亚单位苗均显示了良好的免疫性能，但因受到价格的限制往往难以实际推广应用。因此，大多数学者利用痘病毒、火鸡疱疹病毒和某些细菌作为载体，插入新城疫病毒HN或F基因，通过动物接种，使接种鸡得到免疫保护。载体病毒或细菌表达目标抗原可以最大限度地不受接种动物体内新城疫抗体的干扰，随后发展了包括痘病毒、疱疹病毒、反转录病毒和沙门氏菌减毒株等活载体重组体，其中以重组痘病毒和疱疹病毒研究最为深入。
2、2 弱毒活疫苗
用新城疫弱毒苗是目前许多国家用来预防鸡新城疫的常规而广泛的方法。弱毒疫苗系用鸡新城疫低毒毒株接种敏感鸡胚培养，收获感染鸡胚尿囊液，加适当稳定剂，经冷冻真空干燥制成的冻干苗。在我国使用的弱毒疫苗有两种类型：中等毒力的I系疫苗以及弱毒的Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系和V4弱毒疫苗。其中Ⅰ系苗属于中等毒力苗,免疫后鸡体产生抗体快,抗体维持时间长(3～5周),但Ⅰ系苗对雏鸡和产蛋鸡均有一定的致病力,使用时应注意。多用于60～120日龄的青年鸡的加强免疫。Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系苗等均为弱毒疫苗,通常用于青年鸡群的早期接种,而Ⅳ系苗的毒力相对Ⅱ系、Ⅲ系稍强,对鸡群具有较好的免疫保护性,是目前使用较多的弱毒苗。
2、3 灭活疫苗
灭活疫苗会使受种者产生以体液免疫为主的免疫反应，它产生的抗体有中和、清除病原微生物及其产生的毒素作用，对细胞外感染的病原微生物有较好的保护效果。灭活疫苗对病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫的保护效果较差或无效。灭活疫苗是经处理而致死的病原体，安全性好，免疫应激反应小。其优缺点见表1。Takada等通过鼻内接种ND灭活疫苗，能够引起局部和全身的抗体反应，对致死量的NDV强毒鼻内攻毒产生保护力，其免疫效应通过配合使用霍乱毒素B亚单位(CTB)的佐剂可得到增强。沈志强等用NDV Clone-30株病毒接种非免疫鸡胚，制备抗原液，经甲醛灭活后与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化，研制成鸡ND蜂胶灭活疫苗，其安全性和免疫原性良好。目前预防鸡新城疫灭活苗使用较多的为油乳剂灭活疫苗。
2、4 联苗
目前国内外生产的鸡用联苗日渐增多，采用联苗可以减少对鸡的免疫次数和应激，可以用来防治鸡的各种疾病。2005年12月24日，我国农业部在北京宣布，我国成功研制了禽流感一新城疫重组二联活疫苗，并正式批准生产。美国在27个苗中就有18个是联合苗，日本生产的鸡所用联合苗占鸡用苗的40％，如鸡新城疫一传染性支气管炎疫苗，新城疫一鸡痘疫苗，新城疫一鼻炎疫苗等。赵恒章等通过斌验证明，新城疫一传染性支气管炎二联油乳剂灭活苗接种21日龄雏鸡后，14天后便能产生有效的保护抗体。王宏俊等经过试验，发现当NDV+AIV(H9)二联苗免疫剂量为O．5毫升／只时，免疫后2l天鸡血清中 AIV及NDV的HI抗体均大于28，并具有很好的免疫保护性，能够耐受AIV(H9亚型)及NDV F48的攻击。新城疫传染性支气管炎联合疫苗已早研制成功，并可将2 种病毒接种于同一鸡胚中生产疫苗，试验结果证明这种疫苗具有良好的免疫效果和实用价值。王丽男等对鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联活疫苗的安全性和免疫效力进行了试验，结果证明该疫苗的安全性和免疫效果良好。用常规量的1 0 倍剂量接种雏鸡未见不良反应。
2、5 中药防治
长期以来,中药饲料添加剂在兽医临床上防治鸡新城疫病取得了较好疗效,适合于临床推广。兽医工作者通过提取中药有效成分后作为疫苗免疫佐剂应用,可大大降低疫苗与中药的使用次数和剂量,提高鸡新城疫免疫效果,从而更有效地防治鸡新城疫病。中药佐剂能显著促进淋巴细胞转化,提高血清抗体效价,多数时间点与油佐剂的效果相当,部分时间点显著强于油佐剂。目前有中药散剂防治鸡新城疫和中药煎剂防治鸡新城疫两种方法，由于我国养禽业总体水平不高,特别是在某些重大禽类传染性疾病的防治上存在较多问题。另外,当前养禽业中抗生素、化学合成药物、激素等使用不规范,禽类产品药物残留超标而影响出口,禽类排放粪便造成环境污染和破坏生态平衡等。使用了数千年的传统中药具有诸多抗生素等化药无法比拟的优点,可用于鸡新城疫、禽流感等重大禽类传染性疾病的防治。因此,为了生产更多的“健康绿色食品”,有必要进一步加强中药防治禽类疾病的科研投入,使我国养禽业走上健康、良性、持续发展的道路。
3、疫苗的使用方法及注意事项
目前我国对鸡新城疫疫苗的使用方法有：饮水免疫、注射免疫、气雾免疫、滴鼻点眼免疫等。
3、1饮水免疫
首先要保证足够的饮水器，并把饮水器清洗干净，无抗菌、消毒药物残留；饮水免疫前停水2~4小时；疫苗水中不含金属离子和氯离子，可使用凉开水或蒸馏水，最好使用去离子水，并在其中加入2~3%鲜牛奶或0.2~0.3%脱脂奶粉，以稳定病毒活性。然后按要求加入疫苗，混匀后给鸡饮服。
特别注意疫苗的用水量，一般为鸡日饮水量的30%，疫苗用量高于平均用量的2~3倍，保证所有的鸡同时喝到疫苗水，并在0.5~1小时内饮完。如饮水量少，只能让一部分鸡饮上疫苗，造成免疫不均匀；饮水量太多，很长时间饮不完，造成疫苗效价降低。
3、2 注射免疫
注射前要将注射器具彻底消毒，疫苗现配现用，疫苗用灭菌生理盐水或凉开水稀释，不能用热水或含氯的自来水作稀释液，灭活疫苗要摇匀后才能使用；注射剂量要准确，不能任意加大或减少疫苗用量；注射时操作要规范，颈部皮下注射应提起皮肤掌握好角度，针头刺入皮肤与肌肉之间，避免刺伤颈骨或穿针；肌肉注射应根据鸡龄大少确定实施部位，一般胸部龙骨肌肉最厚处注射，避免破血管或内脏器官，造成骨骼损伤及死亡，腿部注射应在腿外侧无血管处，进针时顺腿骨方向刺入，避免刺伤血管神经。
3、3 气雾免疫
主要在大群免疫时应用，但不适宜于30日龄内的雏鸡和存在慢性呼吸道病的鸡群，以免诱发呼吸道系统疾患。气雾免疫时，将疫苗按规定稀释好，用喷雾器或空压机将疫苗液喷成气雾粒子。一般对6周龄以内的雏鸡气雾免疫，气雾粒子为 50μm，而对12周龄雏鸡气雾免疫时，气雾粒子取10~30μm为宜。在鸡头上为约1.5米左右喷雾，喷完后要最大限度地降低通风换气量，以保证气雾免疫效果，同时也要防止通风不良而造成 窒息死亡，一般喷雾后密闭鸡舍10~20分即可。但应注意有鸡支原体感染的鸡群，禁用喷雾接种；疫苗稀释后，应放冷暗处，必须在4小时内用完。
3、4点眼滴鼻
点眼滴鼻适用于鸡新城疫II系、III系、IV系疫苗的接种。对幼雏应用这种方法，可以避免疫苗病毒被母源抗体中和，从而取得比较良好的免疫效果，而且能保证每只鸡普遍得到免疫，且剂量一致。因此，一般认为点眼滴鼻法是鸡疫苗接种的最佳方法，尤其是鸡新城疫苗接种更是如此。用点眼滴鼻法接种时，可把1000只份的疫苗稀释于50或t00毫升生理盐水中，充分摇匀，然后在每只鸡的眼结膜或鼻孔上滴1滴(约0．05m1)。用La Sota弱毒苗0．05毫升滴鼻免疫，同时皮下注射0．3毫升油乳剂灭活苗或蜂胶苗0．5毫升，可获得90％以上的保护率，单独用其中一种苗免疫则效果低得多。
展望
随着我国养禽业的迅猛发展, 对ND 的防治越来越重要。因此研制出高效、安全、生产工艺简单、价格低廉、适用的ND 疫苗有重要意义。此外中兽药是在独特中兽医理论指导之下用于动物疾病防治,兼有营养和药用双重功效,与西药相比具有天然性、多能性、低毒副、不易产生有害残留和耐药性等优点,为动物临床广泛应用。于此同时，建立统一的兽医行政管理监督执法体系，改变现行的分散管理格局，实行从中央到地方的官方兽医制度，尽快与国际接轨，强化畜禽生产管理，加大执法力度，建立绿色畜禽产品专营市场，严格实行准入制，使合格产品进入，不合格的淘汰；扶持绿色品牌龙头企业，让绿色品牌和龙头企业结合，使 绿色品牌优势转化为经济发展优势，真正提高其质量安全水平。目前对鸡新城疫疫苗研究和中药防治，已经成为国际疫苗研究领域最热门的课题之一。
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