检验PCR_pcr检验
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复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-006
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 1页，共 4 页
耗材质检的标准操作程序 1.目的：保证每批用于临床基因扩增检验实验室的耗材质量能符合临床基因扩增检验实验室检验要求，保证新批次的耗材不对检验结果产生偏差。
2.适用范围：各种用于临床基因扩增检验实验室的离心管和吸头 3.操作人: 陈宇明
季秀玲 4.程序细则
所有验收标准均根据本实验室检验标本的要求制定，所制定的验收方法仅适用于本实验室耗材的验收。
4.1 离心管的验收 4.1.1 目测:检查离心管有无畸形、破损、盖子无法关闭。4.1.2 实验检测：每批随机抽样10个离心管用于实验检测。4.1.3 加半量生理盐水后，10000rpm 20min，如发现有管盖爆开或漏液情况发生，即认为该批离心管不符合本临床基因扩增检验实验室实验要求，作退货处理。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 可移动紫外消毒车使用的 标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-016
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 2 页，共 3 页
4.1 当紫外灯管损坏时须更换紫外灯管，保证消毒的效果。4.2 消毒后应记录在临床基因扩增检验实验室日记录表中
记录
1.临床基因扩增检验实验室日记录表（样张）.复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 可移动紫外消毒车使用的 标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-016
生效日期：2005年03月01日
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培训记录
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复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 1 页，共 13 页
室内质量控制的标准操作程序
1.目的：随时了解并控制临床基因扩增检验实验室检测的精密度变化。2.适用范围：各种临床基因扩增检验项目检测全过程 3.相关职任人: 王洁 陈宇明 季秀玲 4.程序细则
4.1临床基因扩增检验实验室的室内质量控制指整个基因扩增检验的所有阶段，包括测定分析前的标本采集处理，测定中的核酸提取、扩增和产物分析以及测定后的结果报告各步骤的质量控制。
4.2质控物：1个试剂空白、1个阴性和2个水平的阳性质控与待测临床标本同等处理提取核酸及扩增检测，实验结束后将质控数据记录在临床基因扩增检验实验室日记录表中。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 2 页，共 13 页
4.3阴性质控：仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管。
4.4阳性质控：HBV-DNA用已知的阳性质控品或HCV-RNA用临床阳性标本来监测核酸提取及扩增效率；用已提取纯化的靶DNA或cDNA来监测基因扩增的有效性。4.5实验有效性判断：临床基因扩增检验实验室负责人核对阴性、阳性质控品的检测结果值，若与预期结果相符，可判定待测标本测定结果有效，一旦质控中有出现任何检测结果与预期值不相符，均应判定实验无效。具体参见实验结果有效性判断的标准操作程序。
4.6定量结果判定：临床基因扩增检验实验室检测操作的工作人员用已知拷贝数的阳性标准品浓度梯度系列同步扩增检测，建立标准曲线（拟合度应≥0.970）,然后根据标准曲线推算出待测样本的拷贝数。
4.7临床基因扩增检验实验室负责人使用Westgard多规则控制程序作为质控判断规则。
老婆我爱你 2009-8-17 16:14:08
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 9 页，共 13 页
4.10.3分析时发现大批甚至所有的标本都扩增了（结果均有数值出现），判断为失控。4.10.4 分析发现阳性对照没有扩增或者结果
4.10.5分析时发现所有标准曲线CT值与平时均至少相差+/-3或以上时，判断为失控。4.10.6分析时发现标准品曲线数少于4个时，应判断为失控。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 10 页，共 13 页
4.11室内质评的持续性改进程序
4.11.1 每半年分别统计HBV-DNA和HCV-RNA在1年内（数据跨度多于1年的统计1年中的数据）的所有斜率、截距、回归率和每次用来构建标准曲线的标准品浓度梯度数量。求出均值和SD；分别统计临床基因扩增检验实验室每个操作的工作人员各个项目各个批号高低值质控品的CV值，分别求出各人所有高值质控品和低值质控品的CV值均数和SD。4.11.2
观察斜率、截距的均值±2SD所求出的值是否在所规定的范 围之内，观察回归率。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 11 页，共 13 页
4.11.3 实施整改3个月后统计此3个月数据，对整改措施做出评估，写出对整改措施的评估报告，分析整改措施对检验质量改善、无效或者导致检验质量下降的原因。若统计数据表明措施无效或措施使实验质量变得更糟糕则去除该措施，根据分析的原因重新制定整改措施；若数据表明整改措施导致检验质量改善，应将整改措施中的内容在修改质量手册时写入。4.11.4所有书面整改措施报告、对整改措施的评估报告、统计资料存档保存至少2年。4.11.5 每季度统计HBV-DNA、HCV-RNA标本检测的阳性率、复做率、阴性率，以监测实验的质量。所有记录保存至少2年。
老婆我爱你 2009-8-17 16:14:47 复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 12 页，共 13 页
参考文献
1.乙型肝炎病毒（HBV）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒使用说明书.2.冯仁丰.统计质量控制.冯仁丰主编.临床检验质量管理技术基础.上海：上海科技技术文献出版社，2003：151-241.3.吴星，王佑春，张华远等.乙型肝炎病毒DNA国家定量标准品的研制及初步应用.中华肝脏病杂志.2003，11（7）：402-404.相关文件
1.临床基因扩增检验实验室实验结果有效性判断的标准操作程序.《临床基因扩增检验实验室标准操作程序（第一版）》.2005：120-123.记录
1.华山医院2005年1～4月临床基因扩增检验实验室HBV和HCV截距统计表.2.临床基因扩增检验实验室日记录表（样张）.3.室内质控失控记录表（样张）.复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室内质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-017
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 13 页，共 13 页
培训记录
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复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室间质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-018
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 1 页，共 6 页
室间质量控制的标准操作程序
1.目的：室间质评（EQA）是临床基因扩增检验实验室质量控制体系中重要部分，是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠性，以及各临床基因扩增检验实验室间结果的可比性的重要手段。
2.适用范围：临床基因扩增检验室 3.相关职任人: 王洁 季秀玲 陈宇明 4.程序细则
4.1
室间质控标本的处理、检测和结果上报 4.1.1 质控标本的接收和验收：收到质控血清后由临床基因扩增检验实验室负责人登记、签字，根据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃保存于样本准备室。4.1.2 室间质控若需要复溶的，检测前先根据说明对质控物进行复溶。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 室间质量控制的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-018
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 2 页，共 6 页
4.1.3 质控样本必须按临床基因扩增检验实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员检测，工作人员必须使用临床基因扩增检验实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。4.1.4 严禁与其它临床基因扩增检验实验室交流室间质评的检测结果。4.2 室间质控的持续性改进程序：分析前（降低样本拒收率）、分析中（缩短TAT）、分析中（减少报告补发率）。
4.2.1质控的检测结果和反馈结果均记录于室间质控记录表，临床基因扩增检验实验室负责人根据反馈结果分析室间质控的状态，如有出控（无法接受的结果）应查找原因，采取相应的措施，并写出书面整改报告。4.2.2 检查收到标本后存放至报告发出的冰箱温度记录，观察是否有温度过高的记录，若有则可能是冰箱温度失控导致DNA或RNA的降解；若没有冰箱温度失控问题，应排除标本收集保存方面的问题。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-006
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 2 页，共 4 页
4.2 吸头的验收 4.2.1 目测：检查吸头有无畸形、破损。4.2.2 实验检测:每批随机抽样10个吸头用于实验检测。4.2.3 套上适合的吸头吸取适量液体，观察加样器的吸孔，在排除堵塞、漏气等加样器因素后，如有异常发现，即认为该批吸头不符合本临床基因扩增检验实验室要求，作退货处理。4.3 抑制物试验 4.3.1 所有新购买的耗材必须经过抑制物试验，证明与前批次耗材没有抑制物差别方可正式启用，经上述检测发现有不合格情况，作退货处理。4.3.2 参与抑制物试验的离心管必须经（121±2）℃15min高压消毒灭菌并烘干，带滤芯的吸头应该直接参与抑制物试验。4.4 按照试剂质检的标准操作程序，同时用老批号的耗材和新批号的耗材处理后，同时上机扩增，若发现使用新批号耗材的结果与用老批号耗材的结果无系统性降低则说明新批号耗材通过抑制物试验。将实验结果记录在耗材验收记录表中。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-006
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 3 页，共 4 页
参考文献
1.乙型肝炎(HBV)荧光定量PCR检测的标准操作程序.《临床基因扩增检验实验室标准操作程序（第一版）》.2005:97-102.2.禽流感病毒通用荧光RT-PCR 检测方法.中华人民共和国国家标准 GB/T 19438.1-2004 相关文件
1.试剂质检的标准操作程序《临床基因扩增检验实验室标准操作程序.（第一版）》.2005:17-21.记录
1.耗材验收记录表（样张）.老婆我爱你 2009-08-14 15:09:04 复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 试剂质检的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-007
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 1页，共 5 页
试剂质检的标准操作程序
1.目的：保证每批用于临床基因扩增检验实验室的试剂质量良好，符合要求。
2.适用范围：各种用于临床基因扩增检验实验室的核酸扩增荧光检测试剂（HBV、HCV）3.操作人：季秀玲、陈宇明 4.程序细则
4.1 收到试剂后，目测试剂是否处于冻存状态。
4.2 核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、检测项目、批准文号、批号和有效期等）和内包装（试剂瓶完整性、真空包装完整性、使用说明书有否等）。4.3 及时将试剂转入试剂准备室的－20℃冰箱保存。将标准品和阴阳性质控品保存在样本准备室的－20℃冰箱保存。
4.4 最迟在前批次试剂存量可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实验1。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 试剂质检的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-007
生效日期：2005年03月01日
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4.5 效验实验1：在使用前批次试剂进行常规实验的同时带上少量新批次的试剂。用新批次试剂空白、阴性质控、低值阳性质控品、高值阳性质控以及2个随机选中的标本，若阴阳性质控结果均与前批试剂差别不大，2个标本的结果与前次结果均相符，可通过验收。若试剂空白、阴性质控出现阳性结果、低值阳性质控品出现阴性结果或结果偏差太大等情况时要求对新批号试剂进行效验实验2。4.6 效验实验2： 4.6.1 要求设置：试剂对照、阴性质控、低值阳性质控品、高值阳性质控各一管，阳性标准品梯度（103、104、105、106、107）。4.6.2 出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白对照出现扩增。如扩增曲线CT值大于27，需重复实验确证试剂污染。b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 试剂质检的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-007
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 3 页，共 5 页
4.6.3 阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。空白对照没有扩增，阴性质控出现扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。4.6.4 阳性对照检出，阳性标准品未被检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大3个循环以上。提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。4.6.5 阴性质控没有扩增，阳性对照正常检出，相关性（－0.97～－1之间）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。4.7 将实验结果记录在试剂验收记录表中。
老婆我爱你 2009-08-14 15:10:10
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 仪器设备管理的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-008
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 1 页，共 4 页
仪器设备管理的标准操作程序
1.目的：保证临床基因扩增检验实验室的仪器设备得到妥善的管理，保障工作正常进行。2.范围：临床基因扩增检验实验室的所有仪器设备
3.职责：仪器设备的管理、维护、保养等的具体事项由临床基因扩增检验实验室负责人负责管理。
4.程序细则
4.1 临床基因扩增检验实验室各实验室的仪器设备各实验室专用。
4.2 建档管理：需要建档管理的临床基因扩增检验实验室仪器设备应包括ABI PRISM 7000型荧光定量PCR仪、微量加样器、高速台式冷冻离心机、生物安全柜。4.2.1 建档的临床基因扩增检验实验室仪器设备的一般情况应包括：名称、制造商名称、型号、序号或其它唯一性标识、接受日期和启用日期、目前放置地点，接受时状态等。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 仪器设备管理的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-008
生效日期：2005年03月01日
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码： 第 2 页，共 4 页
4.2.2 建档的临床基因扩增检验实验室仪器设备的相关文件包括：仪器设备的说明书，操作手册，保修卡等，有关文件（或复印件）的文件序号，名称，校准和/或检定的日期和结果以及下次校准和/或检定的日期、迄今所进行的维护和今后维护计划的细节、管理负责人等。4.2.3 临床基因扩增检验实验室仪器设备的损坏、故障、修理须作如下记录：日期、仪器名称、故障现象、检查情况、处理意见、处理结果、维修人员签名等。4.2.4 有问题的临床基因扩增检验实验室仪器设备加贴明显的黄色停用标识，标识上应有停用日期及原因；可搬动的仪器移至装备科报修，不可移动的设备应该盖上布，封存待修。4.2.5 修好的临床基因扩增检验实验室仪器设备重新经校准、检定或检测合格方能再次投入使用。
复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 仪器设备管理的标准操作程序 版 本 号：1.0
文件编号：HS-JY-CZ-PCR-008
生效日期：2005年03月01日
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4.2.6 临床基因扩增检验实验室仪器设备的报废处理：因使用寿命、损坏、故障导致仪器设备不能满足检测需要时，该设备可报废。由临床基因扩增检验实验室负责人填写报废申请，检验医学中心主任核实，装备科批准后由许小凤在设备档案中签名注销。
4.2.7 临床基因扩增检验实验室的仪器设备按照规定需要进行校准和检定的有：温度计、温度湿度计、微量加样器、ABI PRISM 7000型荧光定量PCR仪。校准报告至少留档保存2年。参考文献
1.申子瑜，李金明等.临床基因扩增检验实验室技术验收表.申子瑜，李金明主编.临床基因扩增检验技术.北京：人民卫生出版社，2002： 196-201.
