植物病害检疫学_植物病害检疫

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植物真菌性病害检疫技术

一、直接检验

适用范围：具明显症状的植物材料

主要工具；放大镜或解剖镜，主要利用肉眼现场快速初检。

例如：小麦矮黑腥病，直接检测，放大镜

二、染色检验法

原理：染病的组织，或病原军本身，经特殊化的化学药品处理后，可带特殊的颜色

例如：

1、马铃薯癌肿病，薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加上一滴1%的“藏红花”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。

三、洗涤检疫法

原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定的样品放入容器内，加一定的无菌水，充分震荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜鉴沉淀物可确定其种类和数量 主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1%吐温溶液等。

主要实验流程：称取样品，洗脱孢子，离心富集，镜检计数

影响检验结果的因素：

1、种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下来

2、离心管内，悬浮液表面常形成一层极难溶降的孢子薄膜，管壁上也可能粘附孢子。

3、将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极其不均匀。

4、操作不够严格，造成人为误差。

例如：（1）小麦矮黑腥病 50g+100ml无菌水，震荡5min,10至15ml,离心3分钟，定容，制片观察

（2）发病轻的麦粒可用0.2%NaOH浸24小时（18—25摄氏度），吸去多余液体，实体显微镜下观察，乌黑发亮的种子有病，淡褐色无病。

四、保湿萌芽检验

原理：种子携带的真菌，无论外表粘附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始潜伏，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。

主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。

主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内萌芽检验等三种方法。

吸水纸法：无菌吸水纸（3层）吸水加上灭菌培养皿在恒温下12h光照黑暗交替。培养、观察

五、分离培养检测

试植检验法：

例如：烟草霜霉病 可将种子0.2%NaCIO灭菌后，植入盛有2%琼脂培养基或任何用于植物水培盐类培养基密封玻璃皿，每200ml培养基平面可播种1000粒种子，在20摄氏度光照下培养，出苗后，可观察是否有异常。

六、PCR技术

例如：小麦印度腥黑穗病 扩增引物为5’—CGTGTGAGCCATGCTACGACT—3’和5’—AACTTCCAAGGCGACCGTTT—3’,在743bp处有一特异性扩增带，其他近似种或相关种均为出现扩增带。