植物检疫实验报告_植物检疫实验指导

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实验一种子洗涤检验法

一、目的要求

掌握种子洗涤检验法，确定麦种样品表面附着带菌种类和带菌量。

二、基本原理

洗涤法是种子检验常用的方法之一，用于检测种子表面附着的真菌孢子或颖壳上的病原线虫，如黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、锈菌的夏孢子以及分生孢子等。其方法是将一定量的被检样品放入容器中，加入一定量的无菌水，充分振荡一定时间，使样品表面所带的病菌孢子尽量洗涤下来，而后将洗涤液经离心机沉淀，镜检沉淀物，确定病原菌种类并计数。

三、材料、试剂与仪器

材料:带菌麦种。试剂:蒸馏水、无菌水等。

仪器:显微镜、振荡器、离心机、血球计数器、接物测微尺、药物天平、三角瓶（100ml）、烧杯（100ml）、刻度离心管、滴管、镊子、载玻片、二甲苯（双层瓶

装）、镜头纸、脱脂纱布等。

四、实验操作

• 从被检种子样品中取25g放入三角瓶中，加无菌水50ml，将三角瓶加塞后在振荡器上振荡15min。

• 将洗涤液分装于两支刻度离心管中，在天平上称重平衡后，放入离心机的对称

孔中，以10000rpm速度离心5min。

• 用吸管吸去上层部分清水，留下1ml管底沉淀液，将两管底沉淀液摇匀，合并

后备用。

• 镜检和测定孢子负荷量）。

五、实验作业

•列出原始数据，计算每克种子上的带菌量。每克种子所带孢子数＝K×N×L/W 其中 N＝1个小方格中孢子的平均数。L＝计数孢子的洗涤液总毫升数。W＝供检验种子克数。