实验动物采血完全指南_实验动物采血指南
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实验动物采血完全指南
凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、CI-离子浓度，必须采取动脉血液。采血时要注意：⑴采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃为宜；⑵采血用具有采用部位一般需要进行消毒；⑶采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂.１．取少量血
ａ．尾静脉
大鼠、小鼠
ｂ．耳静脉
兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊
ｃ．眼底静脉丛
兔、大鼠、小鼠
ｃ．舌下静脉
兔
ｄ．腹壁静脉
青蛙、蟾蜍
ｅ．冠、脚蹼皮下静脉
鸡、鸭、鹅
２．取中量血
ａ．后肢外侧皮下小隐静脉
狗、猴、猫
ｂ．前肢内侧皮下头静脉
狗、猴、猫
ｃ．耳中央动脉
兔
ｄ．颈静脉
狗、猫、兔
ｅ．心脏
豚鼠、大鼠、小鼠
ｆ．断头
大鼠、小鼠
ｇ．翼下静脉
鸡、鸭、鸽、鹅
ｈ．颈动脉
鸡、鸭、鸽、鹅
３．取大量血
ａ．股动脉、颈动脉
狗、猴、猫、兔
ｂ．心脏
狗、猴、猫、兔
ｃ．颈静脉
马、牛、山羊、绵羊
ｄ．摘眼球
大鼠、小鼠
采动物品种
最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)
小 鼠
0.2
0.3
大 鼠
豚 鼠
兔
狼 狗
500
猎 狗
200
猴
1.割(剪)尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。
2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。
3.眼眶静脉丛采血 采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。
4.断头取血 采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml;大鼠约5-10ml。
5.心脏采血 鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml；大鼠约0.8-1.2ml。
6.颈动静脉采血 先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。
7.腹主动脉采血 最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀，剪断动脉，使血液喷入盛器。
8.股动(静)脉采血 先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管。体重15-20g 小鼠采血约0.2-0.8ml，大鼠约0.4-0.6ml。正在做小鼠肿瘤动物模型方面的实验，对于小鼠的取血方法，效果比较满意：
１尾动脉针刺取血：将小鼠固定后，用２５G（５号）针头，在远端垂直刺入为正中动脉，用２００ul微量吸管吸取。该方法一次可以取0.2-0.3ml，比较安全可靠，可多次反复采血。
２小鼠心脏穿刺采血：需技术熟练，不过可以获得较多血标本。小鼠麻醉后固定，一助手用刀柄推挤右侧胸廓，使心脏相对固定，取血者用２９G胰岛素注射针在心尖搏动最强处或第三肋间胸骨左缘４mm处进针，刺入８－１０mm后，便回抽便缓慢拔出针，见到血液回流后，固定针头，抽取需的血标本量。技术熟练可以多次取血，间隔２－３天。
总结一下小鼠采血的几个问题：
1。最大安全采血量：小鼠循环血量占体重的6%，或50-70mi/kg 采血占全血量的10%不会对机体造成严重的不良影响。3-4周后可以重新采集一次。特别注意的是：老年小鼠血量降低。疾病会加重不良反应，所以必须考虑这些影响因素。采血后应补充响应体积的液体
如果需要很短时间反复采血，比如每天一次，每次的采血量不应超过全血的1%。30g*6%=血量1.8mls 1.8mls*10%=0.18mls(最大安全采血量)2。隐静脉采血法
隐静脉采血法是小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是不用麻醉 3。颈静脉采血法
隐静脉采血法也是小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是需要麻醉 4。心脏穿刺采血法。麻醉动物 将动物仰放 局部酒精消毒，用塑料注射器，从动物的左侧胸部，肋沿下，心尖部向右侧15-30度角刺入心脏，给小负压，小心操作.采用大鼠股动脉采血。你可以先仔细分离股动脉，然后找医用最小号的静脉留置针，它是有个针芯的，小心一点还是很容易进针，固定好针头，如果您的大鼠不需要再继续存活的话，只需要把试管放在那让它自然放血，一次采血5－8ml是没有问题的。
从颈总或者腹主都可以取出5-6ml。200g的大鼠大概有10ml的血。抗凝方法：
1,乙二胺四乙酸二钠(EDTA-NA2)浓度10%,每0.1ml可使5ml血液不凝固.可用于血液学检验.2,草酸盐合剂 草酸铵6.0g,草酸钾4.0g,水定容到100ml,每0.1ml可使5ml血液不凝固.可用于血液学检验.3,枸橼酸钠 浓度3.8%,每0.5ml可使5ml血液不凝固.但仅使用于血沉检验.4,肝素 浓度0.5-1.0%,每1ml可使3-5ml血液不凝固.可用于血液有机成分与无机成分的测定,需要冰箱保存.作用原理: EDTA-NA2通过夺取血液中的钙离子,以阻止凝固.草酸盐合剂与钙离子结合,形成草酸钙沉淀，以阻止凝固.枸橼酸钠与钙离子形成非离子的可溶性化合物而阻止血凝。肝素阻止血液中的凝血酶原形成凝血酶而阻止凝集.常用的血液抗凝剂1、1%肝素溶液0.1ml于试管内，旋转试管，使溶液均匀浸湿试管内壁，放入80～100℃烘箱烤干，每管能使5～10ml血液不凝。急性血压实验时可在充满生理盐水的动脉套管内注入肝素20～25mg。体内抗凝：500～1000u/kg。
市售的肝素注射液每1ml含肝素12500u（相当于肝素钠125mg，即1mg相当于100u）。应置冰箱内保存。
2、枸橼酸钠 3.8%的枸橼酸钠溶液1份可使9份血液不凝，用于红细胞沉降速率的测定。因其抗凝血作用较弱而碱性较强，不适用于供化验用的血液样品。做急性血压实验时则用5～7%的枸橼酸钠溶液。
3、草酸钾 常用于供检验用血液样品的抗凝。在试管内加饱和草酸钾溶液2滴（或10%溶液0.2ml），轻轻敲击试管，使溶液分散到管壁四周，置80℃以下的烘箱中烤干（烘烤温度过高，可使草酸钾分解为碳酸钾而失效），每管能使3～5ml血液不凝。供钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。
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