从蚊子血中检测人DNA_血液样本dna检测方法

2020-02-26 其他范文下载本文

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【摘要】目的从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者的dna分型。方法 chelex100法提取叮咬人后的蚊子血dna，powerplex 16试剂盒和identifiler试剂盒扩增dna。结果蚊子血中可成功检测出被叮咬人的dna基因

型。结论可从蚊子血中检测到被叮咬人的dna数据，结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用，可大大提高检测的准确率和可靠性，对实际检案具有很大帮助。

【关键词】蚊子；人；dna分型

【中图分类号】19919．2；(17

5【文献标识码】b

【文章编号】1007—9297(2004)02—0138—0

2实践中的法医dna检验样品具有多样性、复杂性，且常为

微量、已部分降解的生物物证，例如蚊子血。本文对蚊子体内血

进行dna检测，成功得到被叮咬者dna数据，并进一步对dna

分型结果的可靠性及如何提高检测结果的准确率进行研究。

材料和方法

一、样本和试剂

(一)样本

叮咬人血后不久被拍死的蚊子1只。分别取血痕和混杂有

蚊子残片的部位，1名被叮咬志愿者新鲜静脉血作对照。

(二)试剂与仪器

抗人血红蛋白胶体金测试剂条(e—boat dallas公司)。

powerplex 16 kit(promega公司)。ampflstr identifiler kit

(abi公司)。9700型pcr仪(abi公司)。abi 3100gene6can—

alyzer(abi公司)。

二、方法

(一)dna提取

样本于500 l纯水中浸泡30 min，抗人血红蛋白胶体金测

试剂条检验后，chdex一100法提取dna。

(二)pcr扩增及检测

powerplex 16 system 复合扩增试剂盒、ampflstr identifil—

er system复合扩增试剂盒分别扩增样本dna，反应体系为20“l，abi 3100 genetic analyzer检测。

表1 蚊子体内血扩增结果(powerp~x 16 system)

* 为一个基因座中，两个等位基因峰高比值

** 为一个等位基因丢失。

结果与讨论

从蚊子中提取的血痕抗人hb呈明显阳性反应(+ +)，混杂

血与蚊子残片部位呈阳性反应(+)。dna分型结果见表

1、表

2。

法律与医学杂志2004年第11卷(第2期)

衰2 蚊子体内血扩增结果lampflstr identifiler system)

目前用于法医dna分析的遗传标记大多是人类所特有的，其他动物种类(除去与人类遗传物质极相近的猿等)dna得不到

这些特异的dna 分型系统的结果。而有一些str 位点，如

csf1po，动物样本的扩增产物远远超出人类在该位点的等位基

因阶梯范围。本实验证明从叮咬人后的蚊子血及其与蚊子残片的混合体中，均检出人dna，与志愿者dna分型结果比对，同一

认定几率>99．99％。蚊子dna不影响检测结果。

dna分型结果的准确性很大程度取决于样品中模板dna

· 139 ·的量和纯度。一般来讲，str基因座中由于等位基因属小片段

等位基因峰高基本相同。但当模板dna极微量、dna降解或有

抑制剂存在时，可能导致某一个等位基因优先扩增，一个基因座的两个等位基因峰高会出现不平衡现象。由于现场提取的蚊子

血一般较微量，同时蚊子体内可产生某些酶类，易引起dna降

解，从而影响dna结果。本实验中，在用powerplex 16试剂盒

检测时，蚊子血痕1在penta e、csf1p0、tpox基因座上，出现

一个基因座中两个等位基因峰高比值

上出现等位基因14丢失的现象，易导致错误判型。而identifiler

试剂盒则无此类现象。因此我们认为对此类样品必须：1)重新

扩增；2)另选试剂盒扩增以确定结果是否有可重复性，提高判型的准确性。本实验联合应用identifiler试剂盒对样品pcr扩增、电泳检测后，得到以上几个基因座的正确dna分型结果，提高

了对微量、降解的样品dna检测的可靠性。

本实验研究结果表明，通过对案件现场提取的蚊子血进行

dna检测．可以得出人dna分型结果。为避免模板量微、降解

引起dna分型结果的误判，在实际应用时，应用两