转基因鉴定_转基因鉴定技术

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当我们完成基因转化后，转基因工作还远未结束。外源基因是否进入植物细胞，进入植物细胞的外源基因是否整合到植物染色体上，整合的方式如何，整合到染色体上的外源基因是否表达，这一系列的问题仍需回答，只有获得充分的证据后才可认定被检测的材料是转基因的。

根据国内外十几年的研究，目前认为转基因植物的证据应有以下几点：①要有严格的对照（包括阳性及阴性对照）；②转化当代要提供外源基因整合和表达的分子生物学证据、物理数据（southern杂交，northern杂交，western杂交）与表型数据（酶活性分析或其它）；③提供外源基因控制的表型性状证据（如抗虫、抗病等）；④根据该植物的繁殖方式（有性繁殖还是无性繁殖）提供遗传证据。有性繁殖作物需有目的基因控制的表型性状传递给后代的证据，无性繁殖作物有繁殖一代稳定遗传的证据。外源基因整合的鉴定

证明外源基因在植物染色体上整合的最可靠的方法是DNA Southern分子杂交，只有经过分子杂交鉴定过的植物才可以称为转基因植物。

鉴定转基因植株所涉及到的核酸分子杂交有Southern杂交及Northern杂交。Southern杂交是以DNA或RNA为探针，检测DNA链，不仅可鉴定外源基因的整合，还可初步鉴定插入的拷贝数。

PCR是聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）的简称。由于PCR扩增十分灵敏，有时会出现假阳性扩增，因此检测的只是初步结果。

PCR-Southern杂交是一种近年来开始检测外源基因整合的方法。其首先对被检材料进行外源基因的PCR扩增，然后再用目的基因的同源探针与扩增的特异性条带进行杂交。

此外，RFLP及RAPD技术也可用于鉴定外源基因的整合。

外源基因转录水平的鉴定

转录水平上的检测主要方法是Northern杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：①生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；②免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；③生物学活性的检测。