转化方法和酵母质粒抽提（材料）_酵母质粒提取

转化方法和酵母质粒抽提（材料）由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“酵母质粒提取”。

酵母转化（快速）

侯昕

1、挑单菌落于3ml 2XYPAD培养基中，30°C 200rpm培养至菌浓度为2X108 cell/ml。（约18h）。

2、用1.5ml离心管收集菌液两次，每次1ml，13500rpm，常温离心30秒。3、4、2mg/ml carrier DNA变性，100°C 5分钟，置冰上备用。在菌中依次加入

50％PEG3350

240ul

1M LiAc

34ul 2mg/ml S.S.carrier DNA

50ul plasmid DNA(各1ug)

36ul 每加入一种后，要吸打混匀。5、6、42°C水浴1－3小时。

13500rpm离心1分钟，吸弃上清。沉淀中加500ul水，吸打均匀，100ul涂皿。

7、30°C培养两天

此方法可用于已知蛋白互做检测，将两个质粒共转化。

2×YPAD：Yeast Extract

16g

2mg/ml carrier DNA：

Peptone

32g

鲑鱼精DNA（Sima D1626）

Glucose

32g

溶于水，低温放置过夜，灭

Adenine hemisulfate

80mg

菌后－20°C保存。

d2 H2O

800ml 酵母转化（高效）

侯昕

1、挑酵母单菌落于100ml SC液体培养基中，30°C，200rpm摇至菌浓度为2X107 cell/ml（稀释20倍，OD545或OD600为0.1）。※或挑酵母单菌落于50ml 2XYPAD液体培养基中，30°C，200rpm摇至菌浓度为2X108cell/ml（稀释200倍，OD545或OD600为0.1）。

2、用两个50ml离心管分别收集40ml菌液，3000g，常温离心5分钟。

3、将菌分别转入两瓶150ml 2XYPAD培养基中，扩大培养至菌浓度为2X107cell/ml。

4、用500ml离心管收集300ml菌液，3000g，5分钟。用 200mlddH2O洗两次，将菌转入一个50ml离心管。

5、2mg/ml carrier DNA变性，100°C 5分钟，置冰上备用。

6、配Mixture：

50％PEG3350

14.4Mml

1M LiAc

2.16ml 2mg/ml S.S.carrier DNA

3ml plasmid DNA＋ddH2O

2.04ml7、把Mixture加入菌沉淀中，吸打均匀。

8、42°C水域热激45分钟；每5分钟摇一下，使其受热均匀。

9、3000g，离心5分钟，弃上清，菌沉淀中加40ml水，吸打均匀，涂皿，100－200u/皿。

此方法可用于酵母双杂交文库筛选，建议分步转化。

酵母质粒抽提

侯昕

1、收集菌液，10000g，离心10秒。

2、菌沉淀中加200ul YLS，牙签打散。

3、加200ul 苯酚氯仿异戊醇（25：24：1），摇5分钟，13000rpm，离心5分钟。

4、将上层转入一新离心管中，重复3。

5、将上层转入一新离心管中，加20ul 3M NaOAc（pH5.2）、500ul乙醇，摇匀，10000g，4°C离心10－30分钟。

6、750ul 75％乙醇洗，10000g，离心5－10分钟。

7、重复6。

8、吹干，加10－20ul 水或TE。

此方法得到的质粒可用于电转大肠杆菌

Yeast lysis solution（YLS）：

2％（v/v）

Triton X－100

1％（w/v）

SDS 100mM

NaCl 1mM

EDTA