血液标本抽提DNA_血液dna快速提取方法
血液标本抽提DNA由刀豆文库小编整理,希望给你工作、学习、生活带来方便,猜你可能喜欢“血液dna快速提取方法”。
抗凝全血中提取DNA
准备: 配制80%异丙醇和70%乙醇各1ml备用。选择2ml的 离心管。血液的体积为2ml。先向2ml的离心管中加入1ml的血液。后加入1ml的buffer MG-A,剧烈摇晃20次;10000xg 离心30s,缓慢倒掉上清。再加入1ml的血液,再加入1ml的buffer MG-A,剧烈摇晃20次;10000xg 离心30s,缓慢倒掉上清。注意: 使用底部带有棱角的离心管,以防倒上清时,沉淀滑出离心管。
如果血液体积超过1/2离心管的体积,可分两次进行处理。目的:buffer MG-A的作用是快速裂解细胞,并且促使DNA形成容易沉淀的凝聚物。加入1ml的buffer MG-A。Vortex充分震荡,10000xg 离心 30s,缓慢倒掉上清。加入1ml的buffer MGS, Vortex充分震荡,10000xg 离心30s,缓慢倒掉上清。将离心管倒扣在吸水上2min;或者简短离心,仔细吸除残留的上清。
目的: 洗涤去除DNA凝聚物中的蛋白。加入1ml buffer MGL和10ul Proteinase K,Vortex震荡悬浮沉淀。6 65℃水浴30min(或者更长时间,可过夜),间断摇晃混合。目的:降解蛋白,释放DNA 10000xg 离心 30s,将上清缓慢倒入一个干净的2ml的离心管,加入800ul 80%异丙醇;缓慢翻转离心管20次(出现丝状或簇装DNA凝聚物),再剧烈摇晃20次使DNA凝聚物变得更紧密。10000xg 30s,缓慢倒掉上清。
注意: 在出现丝状或簇状DNA凝聚物后,需剧烈摇晃去除可能包裹在DNA凝胶中的溶液,不然最后DNA溶解困难,或DNA中有盐残留。
在出现DNA凝聚物之前,DNA为溶解状态,需要缓慢翻转离心管。目的:异丙醇能够沉淀DNA 加入1000ul 70% 乙醇,剧烈摇晃20次;10000xg 离心 30s,缓慢倒掉上清。
目的:洗涤去除盐成分。将离心管倒置在干净的吸水纸上至少5min,或者简短离心,仔细吸除残留的乙醇(勿吸除沉淀)。室温放置10min或者37℃ 放置5min挥发乙醇,干燥至DNA沉淀为半湿润状态,无酒精味,效果最佳。目的:干燥挥发乙醇。加入至少200ulTE,提速Vortex 震荡5s或者剧烈摇晃10次,65℃水浴10-60min 溶解DNA,水浴5min后轻弹离心管底部打散DNA凝聚物(一般继续水浴10min 后即可完全溶解);或者65℃水浴过夜。
注意:水浴后,DNA为溶解状态,应避免剧烈操作。目的:溶解DNA。
一.上海生工的试剂盒:1.基因组小量抽提试剂盒BS47350Extractions350元BBIBS474100Extractions420元BBISK125150次280元SangonSK1252100次380元Sangon基本说明:通过将组织细胞裂......
提取液:1M Tris.HClpH8.010ml 0.5M EDTApH8.04ml CTAB2g NaCl8.176g 巯基乙醇2ml(使用时加入) 加70ml ddH2O溶解定容至98ml 步骤:1.在液氮中研磨菌丝体,直到菌丝体研磨成解决......
实验目的:白三烯受体mRNA的表达 实验方法:(半)定量聚合酶联反应 实验步骤:一、抽提RNA 实验器具和材料 1, 实验器具与材料:(1) 移液枪:1ml、200ul、10ul (2) 吸头:1ml、200ul、20ul (3) 吸......
抽提鼠尾DNA(全基因组)1.简介基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子D......
以Chelex 100为介质抽提DNA近年来,DNA的分析技术已广泛地应用于肿瘤学的研究中。获取DNA的传统方法是以新鲜、-70℃或液氮保存的标本为材料,通过蛋白酶K消化,酚、氯仿抽提而获......
