病毒RNA抽提_提取病毒rna方法

病毒RNA抽提由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“提取病毒rna方法”。

病毒RNA的抽提

一、器材

移液枪（量程分别为1000μl，200μl，100μl，10μl，2μl各一支）及其对应的枪头，1.5ml离心管及其架子，手套，酒精灯，酒精棉，镊子，打火机，废物小桶，彩色笔，试管架（放枪用的），平皿（用来装废弃液），离心机。

二、试剂

① TRIzolLS，②Reagen，④氯仿，⑤异丙醇，⑥75%乙醇

三、步骤（无菌操作）

1、预备工作（1）、把以上所有器材（除了离心机外）全部放进无菌操作台紫外线灭菌15-20min。（2）、待灭菌完后，先把离心机进行4℃预冷（3）、把试剂①和样品放进操作台。（4）、酒精灭菌：用镊子夹取酒精棉依次对手、移液枪[1]进行擦拭。（5）、戴上手套，点燃酒精灯，开始做实验。

2、正式操作

1)用烧过的镊子夹取若干个1.5ml离心管（管口是敞开的）放在架子上； 2)装枪头，放在试管架子上；

3)打开试剂①瓶盖，用移液枪移取750μl至离心管，然后吐掉枪，放好枪，再盖好试剂①瓶盖；

4)用移液枪移取250μl样品至离心管中； 5)封好离心管口，同时进行标记[2]；

6)剧烈摇动30s，室温静置3min左右；期间及时把试剂①放回4℃冰箱，并把氯仿放到操[3]作台上；

7)待静置后加氯仿200μl，震荡30s，静置3mins（此时可以不用在操作台上静置）； 8)离心（4℃，12000g，15mins）

[4]9)在无菌操作台上将上层水相移于另一1.5mL微量离心管中，加等量的异丙醇，充分混匀，4℃下作用至少10mins； 10)离心（4℃，10000g，15mins）11)在操作台上弃上清（尽量弃净），再加1mL75%乙醇，轻混； 12)离心（4℃，10000g，10mins）

13)在操作台上倒掉液体，并用镊子夹取黄色枪头把管内水珠引流干净[5]，再把管口对向酒精灯进行室温风干至眼见无水珠（约5-10mins），但不能完全干燥； 14)若不直接转录就加上11.5μlRNAFree 双蒸水，在-20℃保存备用

注意事项：在整个操作过程中，双手不能置于离心管的正上方防止样品被污染； [1] 用酒精棉擦试移液枪时，应从小头到大头擦试，并不能来回擦试； [2] 务必保证离心管管口已封实，而标记后彩色笔也要及时盖上笔盖；

[3] 当手离开无菌操作台时，应脱掉手套，熄灭酒精灯，关掉日光灯，打开紫外线灯，并关上操作窗；

[4] 用刻度为100μl的枪来移取（约4-5次），在操作时应避免戳破中间膜；

[5] 用枪头引流时不能来回引流，当在管底引流时应选择靠近离心时中心点的一侧。