CTAB法抽提真菌DNA_ctab法提取真菌dna

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提取液：

1M Tris.HCl

pH8.0

10ml 0.5M EDTA

pH8.0

4ml CTAB

2g NaCl

8.176g 巯基乙醇

2ml（使用时加入）加70ml ddH2O溶解定容至98ml

步骤：

1.在液氮中研磨菌丝体，直到菌丝体研磨成解决白色细粉

2.将菌丝体装入1.5ml离心管中，加入600μlCTAB提取液，于62-65℃水浴中加热1h，间或振荡数次

3.加入600μlTris饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟

4.取上清至新的离心管中，然后加入1/10体积的3M/L NaAc，1倍体积的异丙醇，轻柔混匀，在-20℃下静置30-60分钟，在12000rpm下离心5分钟 5.离心后去上清，沉淀用70％乙醇润洗2次 6.加入适量的TE缓冲液溶解沉淀，7.加入1μl RNase（10mg/ml）37℃水浴1小时

8.加入1倍体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管

9.加入1倍体积的氯仿，温和振荡几次，在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管中

10.加入2倍体积无水乙醇，-20℃静置30分钟以上，8000rpm离心12分钟

11.去除上清，沉淀用70％乙醇润洗2次，加入100μl TE缓冲液溶解沉淀，放入-20℃存放，待电泳检测