试剂名称_化学试剂名称

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材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1试验对象

已分离纯化的第3代兔骨髓间充质干细胞。1.1.2 主要试剂

二甲基亚砜（DMSO）（购自Sigma公司）H-DMEM(Gibco）DMEM/F-12(Gibco）

Elisa试剂盒（购自R&D公司）

生物素标记山羊抗兔IgG（北京华肽先锋）HRP标记链霉亲和素（北京华肽先锋）DAB显色试剂盒（北京华肽先锋）改良型苏木素（北京华肽先锋）双硫腙染色剂（购自Sigma公司）4%多聚甲醛 中性树胶

碱性磷酸盐缓冲液（PBS）（购自北京鼎国）1.1.3 主要仪器与器械

Stat Fax2100型酶联免疫检测仪（Awarene）HF151UV型CO2培养箱（Heal Force）数码相机：日本佳能IXUS 980IS 电子天平：METTLER TOLEDO AL104 普通离心机：江苏大地自动化仪器厂，800型离心机 85-2恒温磁力搅拌器：金坛市大地自动化仪器厂，冰箱：新飞冰箱 BCD-211 超净工作台：AIR TECH FX101-2型电热鼓风干燥箱（上海树立仪器仪表有限公司）倒置显微镜（Leica）pH计（上海雷磁）

数显恒温水浴锅（金坛市金南仪器制造有限公司）KQ5200E型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）YX-2800型高压灭菌消毒锅（江阴滨江医疗设备有限公司）微量移液器：上海求精生化试剂仪器有限公司 滤器（PALL）

6孔培养板、25cm2塑料培养瓶、盖玻片（Corning）其他：移液枪、离心管、注射器、血细胞计数板等。1.2 主要试剂配制

1.2.1 含1%DMSO的无血清DMEM/F-12 移取40ml配置好的未加血清的DMEM/F-12培养液于50ml试剂瓶中，再吸取400µlDMSO缓慢加入到培养液中，轻轻晃匀，4℃贮存备用。1.2.2 含10％FBS的H-DMEM培养液

量取50ml三蒸水与100ml烧杯中，加入1.56gH-DMEM干粉，加入磁性搅拌棒并置于磁力搅拌器上搅拌至充分溶解（约0.5h），加入0.12gNaHCO3搅拌至完全溶解后转移至100ml容量瓶定容。用1mol/L的NaOH或HCL调整pH至7.1~7.2，加入1ml双抗，按照10％的比例加入约11ml胎牛血清，0.22μm孔径的一次性滤器过滤除菌后4℃贮存备用。1.2.3 双流腙染色剂

吸取5ml二甲基亚砜于10ml离心管中，称取50mg双流腙粉末溶于其中，用移液枪轻轻吹打至溶解完全，0.22µm孔径滤器过滤后分装于0.5ml的锥形管中，密封-20℃冷冻贮存，用前解冻。