华农普通植物病理学实验指导_普通植物病理学实验三

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实验

一、植物病害的认识

一、目的要求

通过室内、外观察，对什么是病害，病害的病状表现，病害发生原因及条件，病害对农业生产的危害性等问题，有一个感性认识，从而加深对病害基本概念的理解，并为病害的诊断打下基础。

二、内容及方法

症状是植物生病后所表现的病态。病状和病征总称为症状，病状是指植物本身所表现出来的不正常的疾病状态（如植株矮缩、黄化、萎蔫、坏死、斑点等），病征是指植物病部上病原物所构成的宏观外貌（如霉状物、粉状物、溢脓等）。

症状是诊断病害的佐证，也是病害命名的依据之一，有的病害病状显著（如花叶病等），有的病害则病征显著（如白粉病等），有的病害则二者都显著（如黑穗病、甘薯软腐病等），不少病害就是以病状（如水稻徒长病、花生丛枝病等）或病征（如小麦黑穗病、锈病、白粉病等）命名的。

通过下列病害症状的观察，初步掌握植物病害症状的主要类型。根据病害的表现，可把病状分为：变色、坏死、腐烂、萎蔫和畸形五类：

（一）变色类：植物受害后，局部或全株失去正常的绿色，称为变色。1．黄化——植物绿色部分的叶绿素形成受抑制呈退绿或被破坏呈黄化。2．花叶——植物绿色部分局部的叶绿素受抑制或破坏，呈现黄绿相间。3．条纹——黄色部分呈条状称为条纹。

4．红叶——叶绿素形成受抑制，花青素形成过旺，叶片变成红色或紫色。

（二）班点状：植物的细胞和组织受到病原物的破坏而死亡，形成各式各样的病斑。由于病斑的颜色不同，有黑斑、褐斑、灰斑、白斑等。病斑的形状不一，有圆形、椭圆形、棱形、不规则形等。有时具有轮纹或花纹，有的病斑受叶脉限制而形成角斑。有的沿叶脉发展而形成的条纹或条斑。有的病斑周围有明显的边缘，有的边缘不明显。在根、茎、叶、叶柄、果和穗等部位都可以发生坏死性病斑。

（三）腐烂类：植物组织细胞受到病原物的破坏和分解而发生腐烂。如根腐、茎基腐、块茎和块根腐烂等。

1．软腐和干腐——含水分较多的软柔组织，有的细胞间的中胶层被病原物所分泌的酶所分解，导致细胞分离，组织崩溃，造成软腐或湿病，组织腐烂后，水分散失而干硬收缩，成为干腐。

2．立枯及猝倒——幼苗的根或茎基腐烂、幼苗直立枯死而不倒伏，称为立枯，幼苗迅速整株倒伏称为猝倒。

（四）萎蔫：植株的根或茎部的维管束受病原物的侵害，大量菌体堵塞导管或产生毒素，阻碍或影响水分运输，使枝叶失去膨胀状态而下垂，叶片枯黄，凋萎，以致植株死亡。

（五）畸形：植物受害后，发生增生性或抑制性的病变，造成不正常的形态结构的状态，称为畸形。

1．肿瘤——植物受害后，组织细胞增生，生长发育过度，病部膨大而形成肿瘤。2．丛枝和发根——枝或根过度分枝，产生丛枝或发根现象。

3．矮缩、皱缩——植物受病后，发生抑制性病变，生长发育不良，使植株或器官萎缩、皱缩。4．畸形、卷叶、线叶和叶变——病部组织发育不均匀，呈现扭曲畸形、卷叶、叶片畸形变成细线状，称为线叶。有的器官转化为叶状，称为叶变。

病原物的营养体或繁殖体在植物病部上的宏观结构，称为症征，主要有下列几类：

①霉状物——真菌的繁殖体或营养体在植株病部上表现为明显的霉层，因颜色不同，有绿霉（柑桔青绿霉病），黑霉（甘薯软腐病），灰霉（稻瘟病），赤霉（小麦赤霉病，水稻徒长病）等，有些呈白色或灰色如霜状，则称为霜霉（霜霉病）。

②粉状物——真菌的繁殖体在病部上表现各种粉状结构。1．白粉状物——在病部上呈白粉状，如白粉病。2．黑粉状物——在病部上呈黑色粉状，如黑穗病。

3．锈色粉状物——自病部表皮下泡状病斑破裂后，散出鲜黄色或深褐色粉末，状如铁锈。如锈病。

③小黑粒或小黑点——病原真菌的繁殖体在植物病部产生表面较粗糙的黑色小点（分生孢子盘），如炭疽病、或产生表面较光滑的黑色粒状结构（分生孢子器、子囊壳），称为小黑粒，如黄麻立枯病、小麦白粉病，小麦赤霉病等。

④菌核——病原真菌的营养体在植物受病部位的表面或组织内，形成形状及大小不一的团粒结构，如水稻纹枯病、菌核杆腐病等。

⑤菌脓状物或胶状物——病原细菌在病部常涌出黄色或污白色的脓状或粘胶状溢滴，或用水挤压病部常见污白色混浊液，如水稻白叶枯病，花生青枯病等。

三、注意事项

1．症状及为害情况，常因病原和寄主的种类及不同的发病部位、不同的生育期及环境条件的不同而有差异。

2．细心观察和比较健株与受害后的异常表现，比较各种类型症状的差异及特点。

四、作业

1． 思考题：

①什么叫病害？病害与虫害，机械伤有何不同？ ②认识病害的症状有何意义？ 实验二 植物原真菌——鞭毛菌亚门（Mastigomycotina）

鞭毛菌亚门的真菌多为水生，少数为土生和陆生。

低等的鞭毛菌其营养体为原质团。其它为无隔、多核、发达的菌丝体。

无性繁殖均较发达，产生孢子囊和游动孢子。游动孢子有一根或二根鞭毛，前生、后生或侧生，鞭毛又分尾鞭和茸鞭二种，是鞭毛菌分类的主要依据之一。

有性生殖均以同形配偶子配合产生休眠孢子（囊）或异形配偶配合产生卵孢子。

根据鞭毛特点，鞭毛菌亚门分为四个纲：

1．根钟菌纲（Plasmodiophoromycetes）不等长双根尾鞭。2．壶菌纲（Chytridiomycetes）后生单根尾鞭。3．丝壶菌纲（Hyphochytridiomycets）前生单根茸鞭。4．卵菌纲（Oomycetes）侧生一根尾鞭一根茸鞭。

一、实验内容和材料

1．根肿菌目（Plasmodiophorales）——芸苔根肿菌（Plasmodiophora braicae）。和十字花科根肿病。2．壶菌目（Chtridiales）——玉米节壶菌（Physoderma maydis）和玉米褐斑病。

3．水霉目（Saprolegniales）——水霉属（Saprolegnia）和绵霉属（Achlya）及水稻绵腐病（烂秧）。4．霜霉目（Peronosporales）

（1）瓜果绵腐菌（Pythium aphanidermatum）和猝倒病。

（2）致病疫霉菌（Phytophthora infestans）和马铃薯晚疫病。（3）荔枝霜疫霉菌（Peronophthora litchii）和荔枝霜疫霉病。

（4）禾生梗霉菌（Sclerospora graminicola）和谷子白发病。

（5）古巴拟霜霉菌（Pseudoperonospora cubensis）和黄瓜霜霉病。

（6）寄生霜霉菌（Peronospora parasitica）和十字花科霜霉病。

（7）白锈菌（Albugo candida）和十字花科白锈病。

（8）1~2个霜霉病未鉴定的标本，要求鉴定到属。

二、实验方法与步骤

1． 显微镜观察十字花科根肿病组织切片，有无见到膨大的根细胞内不定形的芸苔根肿菌的原质团？有无见到根细胞内有大量圆球形、厚壁、密集呈鱼卵块状的休眠孢子囊堆？（绘图）

观察白菜根肿病标本，根部的症状属何种类型？地上部表现什么症状？

2．显微镜观察玉米褐斑病组织切片，有无见到病组织的细胞内有许多扁球形、深黄色的菌体，这是什么？菌体上有盖状的痕迹这又是什么？

观察玉米褐斑病标本，病斑发生在什么部位，有什么特点？

3．显微镜观察水霉菌和绵霉菌玻片（或新鲜材料），比较两个属的孢子囊释放游动孢子和孢子囊再生方法有何不同？

观察水霉菌或绵霉菌的卵孢子，雄器和藏卵器是什么形状？如何配合？藏卵器内有几个卵球？

观察水稻绵腐病（烂秧）标本，表现什么特征？症状属何种类型？

4．从培养皿内挑取少许瓜果绵腐菌制成玻片，在显微镜下观察其菌丝体，有无分隔？有无见到姜瓣状或不规则形的孢子囊（绘图）？孢子囊如何释放游动孢子的？有无见到排孢管和泡囊？

雄器和藏卵器如何配合？藏卵器内有几个卵球？ 观察蔬菜苗期猝倒病和瓜果绵腐病的标本，其症状属何种类型？

5．显微镜观察致病疫霉菌玻片，其孢子囊梗与Pythium有何不同？有无见到呈节状膨大的部分？孢子囊什么形态？（绘图）

观察马铃薯晚疫病的标本，病块茎和病叶各表现什么特征？有无见到病叶上的霉轮？这是什么？

6．从培养皿上挑取少许荔枝霜疫霉菌制片，在显微镜下观察注意其孢子囊梗与Phytophthora的有何不同？有无见到卵孢子，什么形态？

观察荔枝霜疫霉病的标本，叶部、花穗和果实等部位各表现什么症状？有无见到霉状物？

7．显微镜观察禾生指梗霉的玻片，其孢子囊梗有何特征？孢子囊什么形态？

取谷子白发病株，有无见到病部有许多黄色粉末状物，这是什么？取一块载玻片滴一滴清水其上，轻轻抖动病株让黄色粉末状物落在水滴上，制成玻片在显微境下观察，卵孢子什么形态？颜色？外壁分多少层？观察谷子白发病各阶段的症状（灰背、白尖、白发）。

8．显微镜观察十字花科白锈组织切片，可见到寄主表皮下面的孢子囊堆，什么形状？孢子囊便什么形状？孢子囊如何着生？病组织内有无见到卵孢子，什么形状？外壁有无花纹？

观察十字花科白锈病标本，叶部和花梗上的症状有何区别？病征有什么特点？

9．任意选取所供的1~2种作物霜霉病标本（黄瓜霜霉病、白菜霜霉病、葡萄霜霉病、菠菜霜霉病、莴苣霜霉病等），挑取病斑背面的霜霉状物少许制成玻片，在显微境下观察，注意其孢子囊梗分枝的方式，孢子囊的形态，查霜霉菌科分属检索表，鉴定出其属名。

观察上述各种霜霉病的标本，注意叶部和茎部的症状有无区别比较其病斑形态和霜霉状物的颜色有无不同？

附：霜霉科主要属简明分类检索表

1．孢囊梗菌丝状，短，很少分枝······················ 指梗疫霉属（Sclcrophthora）1．孢囊梗分枝明显······················· 2 2．孢囊梗上部膨大，分枝呈指掌状·············· 指梗霉属（Sclerospora）2．孢囊梗细长，直径均匀···················· 3 3．孢囊梗单轴，直角分枝，顶端平切状············ 单轴霉属（Plasmopara）3．孢囊梗叉状锐角分枝········· ··········· 4 4．分枝不对称···················

· 假霜霉属（Pseudoperonospora）4．分枝两侧对称························ 5 5．顶端尖细······················· 霜霉属（Peronospora）5．顶端膨大呈掌状，上生小梗，小梗上生孢子囊······· 盘梗霉属（Beremia）

三、作业

1．指明绘图的，按要求绘出，并注明所绘各部分的名称。2． 未知霜霉病菌分属鉴定。实验三

植物病原真菌——接合菌亚门（Zygomycotina）

接合菌亚门的真菌大多数为腐生菌，少数寄生于人、动物、植物及其它真菌上。有一类与高等植物的根共生，结合成互为有利的共生体——内生菌根。

接合菌的营养体多数为发达的、多分枝的无隔菌丝体。无性繁殖在孢子囊内形成不动的孢囊孢子。

有性生殖多以同形配偶囊接触配合的方式产生接合孢子。

接合菌亚门包括接合菌纲（Zygomycetes）和毛菌纲（Trichomycetes）。其中接合菌纲的毛霉目（Mucorales）内有一些是植物的兼寄生菌。

一、实验内容和材料

毛霉目，毛霉科（Mucoraceae）

1．匍枝根霉菌（Rhizopus stolonifer）和番薯软腐病。2．生长在培养基上的毛霉属（Mucor）或犁头霉属（Absidia）。3．接合菌有性生殖异宗结合形成接合孢子的示范材料。

二、实验方法与步骤

1．显微境观察匍枝根霉的营养体和无性繁殖体，注意分清其匍伏枝、假根、孢囊梗、孢子囊、孢囊孢子、囊轴等各部，观察匍枝根霉的接合孢子（绘图）。

观察番薯软腐病标本，其症状属何种类型？

2．从培养皿中挑取少许毛霉或犁头霉的菌落制成玻片，在显微境下观察，与根霉有何差别？ 3．观察接合菌异宗结合的示范材料，在（＋＋）（――）和（＋－）三个组合中哪一个组合才能产生接合孢子。

三、作业

绘匍枝根霉的无性阶段和接合孢子图，并注明各部分名称。实验四 植物病原真菌——子囊菌亚门（Ascomycotina）

子囊菌是真菌中种类最多的一个亚门，多数为腐生菌，也有不少植物的寄生菌，引起许多重要的植物病害。有一些寄生在昆虫上可作生防菌。子囊菌的营养体除一些低等的种类为单细胞或不发达的丝状体外，大多数均为分枝发达的有隔菌丝体。菌丝体有的还可以构成菌核、子座和子实体等各种组织结构。

无性繁殖：多数子囊菌的无性繁殖很发达，低等的以芽殖方式产生芽孢子。多数子囊以分生孢子梗产生各种类型的分生孢子。

有性生殖：子囊菌有性生殖的共同特征是通过多种方式进行性结合后均产生囊状结构的子囊，子囊内再形成一定数目的子囊孢子。低等的子囊菌其子囊为裸生的。多数子囊菌的子囊形成于发育不同、形态有别的组织结构——有性子实体（子囊果）内，子囊的壁有单层和双层的。

子囊菌亚门便根据其子囊果的类型、子囊壁是单层还是双层等特点分为6个纲。1．半子囊菌纲（Hemiascomycetes）2．不整囊菌纲（Plectomycetes）3．核菌纲（Pyrenomycetes）4．腔菌纲（Loculoascomycetes）5．盘菌纲（Discomycetes）6．虫囊菌纲（Laboulbeniomycetes）

一、实验内容和材料

除虫囊菌纲外的五个纲，以核菌纲和腔菌纲为主。1．畸形外囊菌（Taphrina deformans）和桃缩叶病。2．紫红曲霉（Monascus purpureus）的闭囊壳玻片。3．禾白粉菌（Erysiphe graminis）和小麦白粉病。4．待鉴定的几种白粉菌标本。

5．番薯长喙壳菌（Ceratocystis fimbriata）和番薯黑斑病。6．围小丝壳菌（Glomerella cingulata）和炭疽病。7．黑腐皮壳菌（Valsa）和树木腐烂病。8．玉蜀黍赤霉菌（Gibberella zeae）和小麦赤霉病。9．痂囊腔菌（Elsinoe）和疮痂病。

10．球腔菌（Mycosphaerella）和瓜类褐斑病。11．黑星菌属（Venturia）和瓜类褐斑病。

12．核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）和十字花科蔬菜菌核腐烂病。

二、实验方法与步骤

（一）半子囊菌纲，外囊菌目（Taphrinales）

显微境观察桃缩叶病的组织切片，有无见到病叶角质层下有一层排列整齐的裸生子囊层，子囊内有几个子囊孢子？有无见到成熟子囊基部的脚胞？（绘图）注意病叶的栅栏组织发生何种变形？病叶属何种病变？

（二）不整囊菌纲，散囊菌目（Eurotiales）

显微境观察紫红曲霉菌的闭囊壳玻片，其外壁有几层细胞，是紧密的还是松散的？闭囊壳内有无见到完整的子囊，为什么不易见到？

（三）核菌纲

1．白粉菌目（Erysiphales）

（1）显微镜观察白粉菌的分生孢子玻片（或挑取少许禾谷类作物白粉病的白粉状物制片），分生孢子呈什么状态着生？什么形态？

挑取白粉病叶上的小黑粒点制片，在显微镜下观察，有无见到褐色圆球形的闭囊壳？附属丝什么形状？在低倍视野下用小针尖对准成熟的闭囊壳，轻压盖玻片将闭囊壳的外壁压破，闭囊壳内有几个子囊，什么形状？有无见到成熟的子囊孢子，什么形状？每个子囊内有几个子囊孢子？（绘一压破的闭囊壳图，有附属丝、子囊、子囊孢子）显微镜观察禾白粉菌吸器玻片，什么形状？

（2）观察所供的几种植物的白粉病标本，其症状有何共同特点？

任选1~2种白粉病标本，挑取其上的黑褐色小粒点制成玻片，在显微镜下观察，查下列检索表，鉴定出其属名。附：白粉菌科主要属简明分属检索表 1．闭囊壳内有多个子囊 2 1．闭囊壳内只有一个子囊 3 2．附属丝针形，基部膨大 球针壳属（Phyllactinia）2．附属丝菌丝状 白粉属（Erysiphe）

3．附属丝顶部卷曲呈钩状 钩丝壳属（Uncinula）3．附属丝顶部呈叉状分枝 叉丝壳属（Microsphaera）4．附属丝菌丝状，不分枝 单丝壳属（Sphaerotheca）4．附属丝顶部呈叉状分枝 叉丝单囊壳属（Podosphaera）

球壳菌目（Sphaeriales）

（1）显微镜观察番薯长喙壳菌，有无见到具一根长喙的子囊壳？子囊壳内有无完整的子囊？为什么不易见到？子囊孢子什么形状？（绘图）

从病组织上挑取少量黑色霉状物制片，在显微镜下观察，可见到几种类型的内生分生孢子？其形状和细胞壁的厚薄有无区别？

观察番薯黑斑病标本，病苗和病薯块表现什么症状？病部有无见到黑色刺状物和霉层？（2）在显微镜下观察围小丝壳菌引起的炭疽病切片，注意其子囊壳与子座的关系，子囊壳什么形状、颜色？子囊什么形状，如何排列，子囊间有无侧丝？子囊孢子什么形状，单胞？多胞？有无颜色？

观察各种植物的炭疽病标本，有什么病征？

（3）显微镜下观察苹果树腐烂病组织切片，有无见到黑色子座组织，子囊壳什么形状，有无长颈，与子座的关系怎样？子囊内有几个子囊孢子，什么形状、单胞或多胞？有无颜色？ 观察黑腐皮壳菌的无性阶段（Cytospora）、分生孢子器什么形状？有无见到发达的子座组织，孢子器有几个腔室？分生孢子什么形状？单胞、多胞？有无色泽？

观察果树腐皮病标本，属何种类型的症状？病部有无见到黑色小粒点或孢子角？

（4）显微镜观察小麦赤霉病穗的组织切片，注意子囊壳与子座的关系？子囊壳什么形状、颜色？子囊什么形状？有无见到子囊间的拟侧丝？子囊内有几个子囊孢子，怎样排列？子囊孢子什么形状、颜色、有几个分隔？（绘图）

观察小麦赤霉病标本，病穗上有无见到粉红色霉层和蓝黑色小粒点，是什么？ 3．

（四）腔囊菌纲

1．多腔菌目（Myriangiales）

显微镜观察痂囊腔菌引起的疮痂病组织切片，可见到子座内有许多散乱排列的子囊腔，每个子囊腔内有几个子囊？什么形状？子囊壁是单层还是双层的？子囊孢子什么形状，有几个分隔？ 观察柑桔疮痂病、葡萄黑痘病标本，在叶、茎和果实上的症状有何特点？ 2．座囊菌目（Dothidiales）

显微镜观察瓜褐斑病组织切片，子座内的假囊壳什么形状？假囊壳内的子囊什么形状？如何排列？子囊孢子什么形状，单胞还是双胞？有无色（绘图）

观察瓜褐斑病标本，茎部和叶部的症状为何不同，有无见到黑色小粒点，是什么？ 3．格孢腔菌目（Pleosporales）

显微镜观察梨或苹果黑星病组织切片，假囊壳什么形态？假囊壳内的子囊什么形态？如何排列？有无见到子囊间的拟侧丝？子囊孢子在子囊内如何排列？什么形状？什么颜色？双细胞是否大小均等？（绘图）

观察黑星病标本，叶、枝、果实等部的症状各有何特征？

（五）盘囊菌纲，柔膜菌目（Helotiales）

观察核盘菌的菌核萌发形成子囊盘的标本，每一菌核可形成几个子囊盘？子囊盘外观呈什么形状？

显微镜观察核盘菌子囊盘切片，子囊盘可分为子实层、囊层基和囊盘被等部分，仔细观察子囊层的构造，子囊什么形状？如何排列？有无见到子囊间的侧丝？子囊内有几个子囊孢子，什么形状？单胞还是多胞（绘图）

观察核盘菌引起的十字花科作物菌核腐烂病标本，寄主被害部的症状属何种类型？有无见到黑色鼠粪状的菌核？

三、作业

1．上述指明的绘图。2．白粉菌鉴定到属的结果。

实验五 植物病原真菌——担子菌亚门（Basidiomycotina）

担子菌亚门的真菌其中低等的多为寄生或专性寄生菌（活物营养寄生菌），引起许多重要的植物病害，如多种作物上的黑粉病和锈病，高等担子菌多数为腐生的，亦有一些兼寄生菌，一些高等担子菌与高等植物的根共生联结成互为有利的外生菌根。

担子菌的营养体为发达的，分枝有隔菌丝体。一些担子菌的菌丝体上有锁状联合。高等担子菌的营养体能组织成结构紧密的大型子实体，如蘑菇。

担子菌的无性繁殖除锈菌产生双核的夏孢子外，多数都不很发达。有性生殖配合方式简单，性结合后从担子上形成外生型的担孢子。

担子菌根据担子果有无和担子果的发育类型分为三个纲。1．冬孢菌纲（Teliomycetes）2．层菌纲（Hymenomycetes）3．腹菌纲（Gasteromycetes）

一、实验内容和材料

仅做冬孢菌纲

1．栅锈属（Melampsora）和亚麻锈病（M.lini）。

2．柄锈属（Puccinia）和小麦秆锈病（P.graminis）、条锈病（P.striiformis）和叶锈病（P.recondita）3．单孢锈属（Uromyces）和豆类锈病。

4．胶锈属（Gymnosporangium）和苹果锈病（G.yamadai）的性子器和锈子腔阶段以及桧柏上的冬孢子角。

5．黑粉属（Ustilago）和腥黑粉属（Tilletia）典型的冬孢子萌发玻片。6．黑粉菌的主要属及其引起的黑粉、黑穗病。

（1）黑粉属：小麦散黑穗病（Ustilago tritici）或玉米黑粉病（U.maydis）。（2）轴黑粉属（Sphacelotheca）和高梁或玉米丝黑穗病（S.reiliana）。（3）腥黑粉属：小麦腥黑穗病（Tilletia caries）。（4）条黑粉属（Urocystis）和小麦杆黑粉病（U.tritici）。

二、实验方法与步骤

（1）锈菌目（Uredinales）

1.显微镜观察观察亚麻锈病的组织切片，有无见到寄主角质层下排列整齐的冬孢子堆？冬孢子什么形状？有没有柄？相互如何联结的？

观察亚麻锈病标本，表现什么症状？

2．显微镜观察并比较小麦三种锈病的冬抱子有何差别？（给其中一个冬孢子图）

显微镜观察小麦锈菌的夏孢子，什么形状、什么颜色，有无见到外壁的微刺？有无见到发芽孔？（绘图）

观察小麦三种锈病标本，比较其夏孢子堆和冬孢子堆有何差别？

3．从豆类锈病病叶上挑取少许夏孢子和冬孢子分别制片，在显微镜下观察，（绘图）和柄锈属的冬孢子比较有何不同？

4．显微镜观察苹果锈病组织切片，可见到病叶的表面有瓶状的性子器，有无见到性抱子和受精丝？病叶的背面有袋状的锈子腔，锈孢子是如何着生？ 从桧柏上的冬孢子堆挑取少量胶状物制片，在显微镜下观察，有无见到有长柄、双细胞的冬孢子（绘图）？从细胞壁的厚薄程度、冬孢子柄的长短、是否胶化等，比较胶锈属和柄锈属的冬孢子，有什么不同？

观察苹果锈病在苹果叶上和桧柏枝条上的症状，分别为胶锈菌的什么发育阶段？

（二）黑粉菌目（Ustilaginales）

1．显微镜观察黑粉菌属和腥黑粉属的冬孢子萌发的玻片，比较它们的萌发方式有什么不同（担子有无分隔、担孢子侧生还是顶生、担抱子的数目和形态）。（绘图）

2．取小麦散黑穗病或玉米黑粉病、高粱或玉米丝黑穗病、小麦黑穗病和小麦秆黑粉病的标本，分别挑取少许黑粉状物制片，在显微镜下观察，比较黑粉属、轴黑粉属、腥黑粉属和条黑粉属的冬孢子有什么不同。（绘2个属的冬孢子图）

观察上述各种黑穗、黑粉病的标本，注意其发病部位，是局部性的还是全株性？

三、作业

上述指明的几个绘图。

实验六

植物病原真菌——半知菌亚门（Deuteromycotina）

半知菌亚门的真菌很多是腐生的。有些在工业上有重要的用途；有些是人和动物的寄生菌；还有一些可引起重要的植物病害。

其共同特点是不进行或自然情况下不常进行有性生殖；营养体除少数为单细胞外，大多数为发达的有隔菌丝；无性繁殖产生各种类型的分生孢子。

半知菌根据其营养体、无性繁殖体的形态以及分生孢子发育的特点分为三个形式纲。芽孢纲（Blastomycetes）：营养体单细胞，以芽殖方式产生芽孢子。

丝孢纲（Hyphomycetes）：营养体为菌丝体，分生孢子产生于散生的孢子梗或分生孢子座上。还有一些不产生任何分生孢子，只有营养菌丝和菌核。

腔孢纲（Coelomycetes）：营养体为菌丝体，分生孢子产生于孢子盘上或孢子器内。

一、实验内容和材料

（一）丝孢纲

1．稻梨形孢菌（Pyicularia oryzae）和稻瘟病。

2． 黄萎轮枝菌（Verticilium albo-atrum）或大丽花轮枝菌（V.dahliae）和植物的黄萎病。3． 长蠕孢属（Bipolaria）和玉米小斑病（B.maydis）。4．尾孢属（Cercospora）和芹菜叶斑病（C.apii）。5．镰孢属（Fusarium）和植物的枯萎病。

6．立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和植物的幼苗立枯病。7．齐整小核菌（Sclerotium rolfsii）和植物的白绢病。

（二）腔孢纲

8．刺盘孢属（Colletotrichum）和盘长孢属（Gloeosporium）和植物的炭疽病。9．茎点属（Phoma）或大茎点属（Macrophoma）和果实的黑腐病。10．壳针孢属（Septoria）和芹菜斑枯病（S.apii）。

二、实验方法和步骤

1．显微境下观察稻梨孢菌的玻片，分生孢子梗什么形态？分生孢子什么形状？有几个分隔？有无颜色？（绘图）

2．显微镜观察轮枝菌的玻片，分生孢子梗什么形态？怎样分枝？

3．显微镜观察玉米小斑病菌，分生孢子什么形状，有几个分隔？有无颜色？（绘图）4．显微镜观察芹菜叶斑病菌（自制玻片）：分生孢子梗和分生孢子什么形态？几个分隔？有无颜色？（绘图）

5．从培养皿的菌落上挑取少许镰孢菌制成玻片，在显微镜下观察，有无见到两种分生孢子？各呈什么形态？分生孢子梗什么形态？

6．从培养皿的菌落上挑取少许立枯丝核菌制成玻片，在显微镜下观察，菌丝如何分枝的。（绘图）

7．观察齐整小核菌的培养特性，培养基表面生长的菌丝有何特征？菌核什么形状？显微镜观察菌核的切片，表层细胞和内部细胞有何不同？

8．显微镜观察炭疽病的组织切片，分生孢子盘什么形状？分生孢子梗和分生孢子什么形状？

有无见到黑色的刚毛？（绘图）

9，显微镜观察果实黑腐病的组织切片，分生孢子器什么形状？有无见到孔口？分生孢子什么形状？有无分隔？有无颜色？（绘图）

10．显微镜观察芹菜斑枯病的组织切片，分生孢子什么形状？有几个分隔？ 11．观察半知菌主要属引起的植物病害，属何种类型的症状？产生什么病征？

实验七

植物细菌病害的症状观察及细菌病害的室内诊断

一、实验材料及用具

各种细菌病害症状类型的标本、图片、挂图；待诊断的细菌病害的新鲜病株，已知血清的稀释液；手持放大镜、干净的载玻片、盖玻片、生理盐水、吸水纸、刀、针、剪等用具。

二、实验步骤

（一）症状观察

1．腐烂

柔嫩多计肥厚的植物器官或组织，尤其是贮藏器官组织、受病原细菌寄生后往往发生腐烂，造成这类症状的细菌，大多是从植物的伤口侵人的。欧氏杆菌属（Erwinia）中的许多种都可以引起多种植物发生腐烂，如白菜软腐病。

2．叶斑、叶枯

叶斑病主要是叶片局部的细胞或组织受细菌侵染后坏死而形成的症状。在具有网状叶脉的寄主植物上叶斑常呈多角形，如黄单胞杆菌（Xanthomonas sp.）引起的棉花角斑病、豆类叶斑等。在禾谷类作物及其它具平行脉的植物上叶斑多呈现为长条形，如水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病等。

细菌性叶斑病发生初期常呈现半透明的水渍状，大多数叶斑病的病斑周围由于毒素的作用，有一黄色的晕圈所包围，有些叶斑病的坏死部分，容易在后期脱落形成穿孔，如黄单胞杆菌（Xanthomonas sp.）引起的桃细菌性穿孔病。

3．萎蔫

是侵染维管束组织的细菌所引起的症状，如棒状杆菌（Clavibacter sp.）所引起的马铃薯环腐病，假单胞杆菌（Pseudomonas sp.）引起的花生、烟草、番茄、桑树等的青枯病。4．癌肿和其它畸形

植物的薄壁组织局部受病原细菌侵染后发生的刺激性病变，引起癌肿的病原细菌可以产生一些生长激素，刺激细胞分裂增多或体积增大，而呈现瘿瘤或簇生等现象，如癌肿野杆菌（Agrobacterium tumefaciens）所引致的苹果毛根病，仁果类，核果类及葡萄的根癌病。

（二）细菌病害的室内诊断 1．显微镜检验法

将典型、新鲜的病组织洗刷干净，用解剖刀或剪刀在病健交界处剪取一小块病组织，置于干净的载玻片上，加一滴无菌水，盖上盖玻片，在低倍显微镜下观察，若有大量的细菌从病组织中溢出，则可初步诊断该病组织可能是由细菌引起的病害。

2．血清反应法（载玻片凝集反应）

（1）在干净的载玻片上滴一滴生理盐水，取一小块病组织浸于其中，静置片刻，让细菌自行涌出，（可在显微镜下观察）制成细菌悬浮液。

（2）将病组织移去，加一滴已知病原细菌的抗血清，充分混合，观察是否有凝集集物形成，可另设一滴不加抗血清的作对照。

三、作业

1． 描述所观察的各类细菌病害的症状特点。2． 细菌病害血清诊断法的检验结果。

实验八 植物病原细菌的分离

一、目的学习从感病的植物组织中分离出病原细菌纯培养物的操作技术。

二、实验材料及用具 新鲜的病组织。

酒精灯、灭菌的细菌培养基、灭菌的干净培养皿、分离接种用具、升汞液（0.1%）、漂白粉液（1:14）70％酒精、油性笔、火柴。

三、分离前的准备工作

1．将实验室打扫干净，关闭门窗，减少空气流通； 2．用0.1％升汞液将实验台面抹洗干净，再铺上湿毛巾； 3．将所需用品都放好在工作台，操作时尽量避免走动。

四、病原细菌的分离

（一）平板划线分离法

1．将冲洗干净的新鲜病组织剪切成小块，在70%酒精中浸一会迅速移入0.1%升汞液中处理1－2分钟（时间的长短因材料不同而异），后移入漂白粉液中浸1－2分钟，再用无菌水冲洗干净。（如分离的材料为肥厚多汁的组织或较粗的茎、根、枝条等，可将其表面蘸上酒精并在火焰上灼烧进行表面清毒，然后以灭菌的解剖刀削去表皮，在病部边缘挑取一小病组织块）。

2．取一灭菌的培养皿，加一滴无菌水在皿内，将上述已经过表面消毒的病组织置于其中，用灭菌的解剖刀将病组织切碎，静置片刻，制成细菌悬浮液。

3．用灭菌的移植环蘸少许细菌悬浮液，在琼脂平板上自左至右划数条线，使用过的移植环再经火焰灭菌，移动培养皿的位置，移植环，连接上线末再划数条线，如此操作。在该培养皿的琼脂平板上重划3－4次，便可能获得分散的单个菌落。

4．将培养皿倒置，在26－28℃的恒温培养箱中培养1－2天后，观察检查，如见分散的单个细菌落则进行移种，纯化并保存。

（二）平皿稀释法 1．取四个灭菌的培养皿按顺序排列，每一个皿内各加入一滴无菌水。2．细菌悬浮液的制备（同上项2）

3．用灭菌的移植环蘸取1－2环菌液移入第二个培养皿中，略略搅动，再从第二个培养皿内蘸取1－2环稀释后的菌液移入第三个培养皿内，如此依次移至第四个培养皿或至最后一个培养皿为止。

4．将已完全熔化的培养基待其冷却至45℃左右，在各培养皿内倒入10－15毫升培养基，轻轻摇动使其与皿内的细菌悬液充分混匀，静置待其冷凝后即按上项方法培养、检查、纯化和保存。

五、作业

交分离所得的纯培养菌种1支。

实验九

植物病毒的传染试验

一、实验材料

TMV病叶

健康的心叶烟植株

白菜花叶病

健康的白菜植株

无毒菜蚜

金钢砂、纱布、消毒研钵、毛笔、标签等。

二、实验步骤和方法

（一）植物病毒汁液摩擦传染试验 1．制备病毒汁液：取一小块TMV病叶，用水洗干净，放在研钵中磨碎，加蒸馏水2~10倍再进行研磨使得到病毒汁液。

2．用肥皂洗净双手，取健康的心叶烟植株一盆，在其上部已展开的三片叶的正面撒上一层薄薄的金钢砂。

3．左手托住叶片，用右手的拇指和食指夹住纱布沾取少许病毒汁液，轻抹叶片，注意叶片各部位都要抹到，但不要重复以免擦伤叶表面，抹后用蒸馏水冲洗叶面以去除多余的病毒汁液及残存的金钢砂，接种后即告完毕。

4．用肥皂将双手充分洗干净，按上法用健株烟叶研磨的汁液进行接种作对照。5．将接过种的植株及对照植株放入无虫温室中，三天后观察发病情况，记录结果。

（二）介体蚜虫传染试验

1．用毛笔取无毒菜蚜20头，放在小皿中饿半小时后，移到白菜花叶病株上（病叶上先放上一张1平方厘米的白纸，将蚜虫先移到纸片上，让其慢慢爬到病叶上）饲毒5－10分钟。

2．将饲过毒的蚜虫用毛笔转移到4株白菜健苗上，每株5头（每一健苗先放一张1平方厘米的白纸片，将带毒蚜虫移到纸片上，任其爬到叶片上取食）传毒接种24小时后，喷乐果将所有蚜虫杀死。

3．用无毒菜蚜直接移到白菜健苗取食作为对照。4．2－3周后，观察发病情况并记录。

三、作业

两种传染病毒试验记录结果及写出分析报告。

实验十

植物病毒的物理性质测定

一、实验材料 TMV病

健康的心叶烟幼苗

消毒研钵、纱布、薄壁小管、烧杯、水浴箱、试管、棉花、1毫升及10毫升吸管、小碟等。

二、实验步骤和方法

（一）失毒温度的测定

1．取TMV病叶在研钵中研碎，用双层纱布过滤压取汁液，1毫升吸管将病毒汁液分别装入5个薄壁小管中，分别标记处理的温度。

2．将恒温水浴箱调至95℃、90℃、80℃、70℃和60℃五个温度等级。

3．从高温至低温，依次每种温度放入一支装有TMV病毒汁液的薄壁小试管，各处理10分钟，取出立即置冷水中冷却。

4．按常规汁液摩擦接种法，分别将五种不同温度处理过的病毒汁液接种在心叶烟的健康植株上，挂好标签，放置于无虫温室中。

5．接种后第三天观察接种过的叶片坏死枯斑出现的情况，记录结果。失去侵染力的最低温度即为该病毒的失毒温度。

（二）稀释终点的测定

l．取六个小碟分别标记稀释度为1:10，1:102，1:103，1:104，1:105、1:106。2．用10毫升的吸管吸取蒸馏水分别放入六个小碟内，每碟9毫升。吸取1毫升TMV汁液，放入1:10的小碟中，搅匀。

4．从1:10的小碟中吸取1毫升稀释1O倍的病毒汁液移入第二个小碟中，获得1:102的病毒稀释液。按同法依次稀释至第六个小碟，分别获得六种不同稀释度的病毒汁液。5．从稀至浓，将六种不同稀释度的病毒汁液分别用常规接种法接种在健康的心叶烟植株上，置无虫的温室中。

6．接种后第三天观察接种过的叶片坏死枯斑出现的情况，记录结果。失去浸染力前一个稀释度即为该病毒的稀释终点。

三、作业

病毒致死温度和稀释终点试验记录结果及写出分析报告。

实验十一 植物线虫病的症状观察、病原线虫的识别及线虫的常规分离方法

一、实验材料及用具

1．常见的农作物线虫病害标本：小麦粒线虫病；甘薯茎线虫病；花生或柑桔根结线虫病；大豆胞囊线虫病；水稻潜根线虫病；水稻干尖线虫病等。

2．显微镜镜检用具。

3．带有活线虫的植物病组织或土壤标样。

4．分离线虫用的漏斗、纱布、小烧杯、吸管、离心管等。

二、实验步骤和方法

1． 取所提供的各种植物线虫病害的标本，观察其受害部位及症状特点并作记载。

2．显微镜观察几种植物线虫各虫态的形态特征。注意其是雌雄同形还是雌雄异形，及其内部主要器官。

3． 用漏斗法分离病植物或土壤中的活线虫，取病组织或土壤20克，置于盛有清水的纱网漏斗中（用双层纱布包扎亦可），在20－25℃的室温下静置24小时。线虫即会慢慢游出滑落到漏斗底部的乳胶管中，然后轻轻打开乳胶管的止水夹，用小烧杯收集漏斗底部的液体，用每分钟约1000转的离心机将此液体进行离心去掉上层清液，用吸管吸取一滴沉淀液置载玻片上，在低倍显微镜下检查有无活动的线虫？注意区别土壤中的寄生线虫和非寄生线虫。

三、作业

1．描述2－3种线虫病的症状特点。2．绘一种植物病原线虫的形态图。

3．记述线虫分离的结果。