进修总结_进修后总结

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进修小结

本人在上海瑞金医院临床病毒实验室系统的学习PCR实验室布局、要求和管理，详细了解ISO15189质量管理体系的内容，熟悉PCR实验室SOP程序文件的编写过程，浏览PCR实验室检验流程中所以文件和记录表的生成和存档，掌握乙肝病毒DNA检测、丙肝病毒RNA检测、人乳头瘤病毒（HPV）DNA检测、HCV基因分型和HBV核苷类药物耐药分析。能够熟练的操作Lightcycle 480荧光定量PCR分析仪，ABI–7500荧光定量PCR分析仪，Roche COBAS AmpliPrep & COBAS TaqMan48全自动定量PCR分析仪。下面仅侧重介绍本人两点希望：

1.重点希望我科室开展乙型肝炎病毒核苷类药物耐药分析(PCR-DNA序列分析)，其检验目的及原理：采用PCR扩增技术扩增乙型肝炎病毒基因组RT区，并进行DNA测序，经与野毒株序列相比较，观察HBV RT区有无与核苷类药物耐药相关的变异发送生。耐药突变测序分析时运用“乙肝病毒耐药检测”分析软件，加载Chromas格式测序文件，观察是否存在下列已知耐药相关突变位点：

 V173L突变(拉米夫定和恩曲他滨耐药相关) L180M突变(拉米夫定、替比夫定、恩曲他滨和恩替卡 韦耐药相关) A181V/T突变(阿德福韦耐药相关) T184G/S/A/C突变(恩替卡韦耐药相关) A194T突变（替诺福韦耐药相关） S202G/I突变（恩替卡韦耐药相关）

 M204V/I突变（即YMDD突变，拉米夫定、替比夫定、恩曲他滨和恩替卡韦耐药相关） N236T突变(阿德福韦耐药相关) M250V突变（恩替卡韦耐药相关）。HBV耐药突变基因检测的临床意义：

（1）抗病毒药物治疗前的药物选择：在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前，进行耐药突变基因检测，可以指导临床医生合理选择抗病毒药物，真正实现个体化诊治。（2）抗病毒药物治疗中的药效监测：在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗过程中，进行耐药突变基因检测，可以监测抗病毒药物治疗效果并及时调整治疗方案。

2.重点期望购置Roche COBAS AmpliPrep & COBAS TaqMan48全自动定量PCR分析仪。它是一款乙肝病毒DNA和丙肝病毒RNA全自动内标定量PCR分析仪，下面以乙肝为例说说检测原理：COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV 测试是一种定量测定人血浆中乙型肝炎病毒（HBV）的体外核酸扩增试验，使用COBAS AmpliPrep仪器自动处理样品，并使用COBAS TaqMan分析仪或COBAS TaqMan 48分析仪自动扩增并检测。COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV测试基于两个主要步骤：（1）制备样品分离HBV DNA，（2）同时发生靶DNA的PCR扩增并测定

27针对靶目标的双标识的分开的寡核苷酸检测探针。COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV测试可自动制备样品，随后自动进行PCR扩增和HBV靶向 DNA和HBV定量标准（QS）DNA的检测。Master Mix试剂包括引物对和针对HBV DNA和 HBV QS DNA的探针。Master Mix是为了确保定量HBV基因型A到G。扩增DNA的检测是使用靶特异性和QS-特异性的双标识寡核苷酸检测探针，该探针可分别独立确定HBV扩增子和HBV QS扩增子。

HBV病毒DNA的定量使用HBV QS完成。其可对抑制作用进行补偿并控制制备和扩增过程，从而对每个样品中的HBV DNA 进行更为准确的定量。HBV QS是一种非传染性DNA结构，含有与HBV靶DNA完全相同的引物结合位点的HBV序列以及与一个可允许将HBV QS扩增子与HBV扩增子进行识别的，与区域结合的独特探针。

在已知拷贝份数的每个样品中加入HBV QS，该物质在样品制备的后续步骤中一直存在于样品中，同时进行PCR扩增和分开的双标识寡核苷酸检测探针的检测。COBAS TaqMan分析仪或COBAS TaqMan 48分析仪通过对每个样品和质控品中HBV信号与HBV QS 信号进行比较计算检测样品中HBV DNA浓度。参考区间（附判断限）：