细胞培养注意事项自我总结重要_细胞培养的注意事项

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1.293T细胞贴壁不牢，一般不需要消化直接吹打下细胞即可。如果消化，消化不要太久，1min左右即可；如果是培养了几天后贴壁牢些，可适当放宽时间消化两分钟；

如果传代时消化不充分，没有完全消化成单个细胞，细胞传代后可能会聚集成团生长；PBS洗时可适当多吹打几次，使细胞充分吹散。细胞状态不好后会变瘦、产生大量黑点（细胞碎片)而且换液时也要沿壁缓慢加入培养基，293T很容易被吹起。

2、细胞转染汇合度的选择问题，这对后续的实验很重要

新手做转染，查资料说转染前细胞汇合度50~70%，汇合度过高不利于筛选。

订购了Lipofectamine™ 2000，说明书上说：

“Adherent cells: One day before transfection, plate 0.5-2 x 105 cells in 500 μl of growth medium without antibiotics so that cells will be 90-95% confluent at the time of transfection.”把我弄糊涂了

这两点并不矛盾，具体要根据细胞的生长速度及对Lipofectamine™ 2000的耐受性而决定。Lipofectamine™ 2000具有一定的细胞毒性，在细胞密度稍大的时候对它的耐受性要高些。但是另外一个方面来讲，如果细胞密度过高，也的确不利于转染后续的筛选工作，或者还可能由于细胞密度过大而降低转染效率。所以楼主不要糊涂，可根据你对待转染细胞生长速度的了解，还有转染的目的及后续实验的安排来协调这个汇合度的问题。再者，汇合度也并不是绝对的，不同的人从镜下看出的结果也并不完全一致。所以一些条件还是需要摸索的。

3、H1299需要用1640培养基；细胞生长到90%时就必须传代，这种细胞密度过大，太挤，状态会变坏，所以需要及时传代。

H1299细胞转染效率较高，易于做转染实验

4、Hela细胞生成速度很快，应及时换液。

Hela细胞转染效率较低，不利于做转染实验。