实验教案1_实验教案

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实验教案（课时备课）

课程名称：兽医学实验

课程类型：必修

第2次课

学时：4

上课日期：第5周

1、实验内容：血液常规检验

2、实验目的：掌握血液常规的检查技术，掌握动物血液化验的正常值以及病理变化的意义。本实验为验证性实验。

3、实验重点和难点：白细胞分类中各种白细胞的区分

4、主要参考资料：《兽医临床实验指导》，东北农业大学主编，中国农业出版社，19995、实验内容：

（1）血液沉降速度测定，利用血沉管测量牛血的沉降速度

1．原理

红细胞沉降速度（erythrocyte sedimentation rate ,ESR）与红细胞串钱状的形成、红细胞数目的多少、血浆蛋白的组成以及测定时室温的变化、血沉管倾斜的程度等因素有关。

2．操作方法

魏（Westergren）氏法：魏氏血沉管长30cm，内径为2.5mm，管壁有200个刻度，每个刻度之间距离为1.0mm，附有特制的血沉架。测定方法如下：（1）取3.8％枸橼酸钠液0.4ml置于小试管中。

（2）自颈静脉采血，沿管壁加入上述试管，轻轻混合。

（3）用血沉管吸取抗凝血至刻度0外，用棉花擦去管外血液，直立于血沉架上。（4）经15、30、45、60 min，分别记录红细胞沉降的刻度数，用分数形式表示（分母代表时间，分子代表沉降mm数）。

（2）红细胞计数，用计数板计算牛血的红细胞数

1．原理

血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每μl内的数目。 2．方法

试管稀释法：用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml（或4ml亦可）置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）。擦

去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞，然后试管口加塞，颠倒混合数次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。在此中央大方格内选择四角与最中的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数上不数下”的计数法则

（3）白细胞计数，用计数板对牛的白细胞进行计数

1．原理

用稀释液将红细胞破坏后，计算出每微升血中白细胞数。 2．方法

试管稀释法：用1ml吸管吸取白细胞稀释液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小试管中。用沙利氏管吸取被检血至20μl处，擦去管外粘附的血液，吹入小试管中，反复吸吹数次，以洗净管内所粘附的白细胞，充分振荡混合，再用毛细吸管或沙管吸取被稀释的血液，充入已盖好盖玻片的计数室内，静置1～2min，低倍镜检查。

将计数室四角四个大方格内的全部白细胞依次数完，注意压在左线和上线的计入，压在右线和下线的不计入。

（4）血红蛋白测定（盐酸比色法）

1．原理

血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白,并被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准柱相比，求出每百毫升血液中血红蛋白的克数或百分数。2．方法

（1）向沙利氏比色管内加入N/10盐酸5滴。

（2）用沙利氏吸血管吸血至20μl刻度处，擦去管外沾附的血液。

（3）徐徐吹入沙利氏比色管内，不要产生气泡，再反复吸、吹数次，以洗出沙利氏吸血管中的血液。轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合。

（4）静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止。液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g％表示。

（5）白细胞分类计数，1．制作血涂片后：在载波片上滴一滴血液，之后用盖玻片以45度角匀速进行推片，血片要有头有尾，并且血膜要薄。2．姬姆萨液染色后进行分类

重点难点的解决：通过演示结合讲解予以解决

6、实验报告内容：

（1）写出每项测定的过程及结果（2）分析异常结果的原因（3）血液常规化验的临床意义

实验教案（课时备课）

课程名称：兽医学实验

课程类型：必修

第3次课

学时：4 上课日期：第6周

1、实验内容：药物敏感性实验

2、实验目的：掌握抗菌素药物的敏感性测定方法，从而为临床选用敏感适当的抗菌素打下基础。另一方面认识细菌的耐药性现象。

3、实验重点和难点：药物敏感实验前所用细菌浓度测定

4、主要参考资料： 《兽医药理学实验指导》，林艳春主编，校内教材，2003 《兽医微生物实验指导》，胡桂学主编，中国农业大学出版社，20065、实验内容：

（1）无菌操作制作营养培养基；药敏试验最好用专用Mueller-Hinton 培养基。

（2）涂布已知细菌；细菌经纯培养后接种到肉汤中进行摇床培养，一般用肉眼观察比较混浊即可。将菌液用曲波棒均匀地涂布到培养基上，之后于37℃烘干培养基表面的水分。（3）稀释药液，制作药敏纸片，并贴到培养基表面；将药液按不同细菌所需的浓度进行配置，之后制作药敏纸片，将药敏纸片烘干后贴到培养基表面，各药敏纸片间距一般应距离24mm，每一个平板大约可以贴4～6种药敏片。贴纸片时可轻压，以保证与培养基密切接触，纸片贴上后不可以再移动，因为抗菌素会自动扩散到培养基内。

（4）37℃，培养24小时，观察结果。观察含药纸片周围有无抑菌环，并量其直径（包括纸片直径）大小，用毫米为单位记录。抑菌圈直径在20 mm 以上为极敏，15~20 mm 为高敏，10~14 mm 为中敏，10 mm 以下为低敏，0为不敏。极高、高敏，以该抗菌素的适当剂量治疗试验菌株所引起的感染有效；中敏，表示试验菌株对该种抗菌素的较高剂量才有敏感性；不敏，该抗菌素的治疗剂量完全不能抑制试验菌。试验重点难点解决：通过示范和讲解予以解决

6、实验报告内容：

（1）药敏实验的操作过程；

（2）绘图显示出药物敏感性实验结果，并以文字说明；

（3）对实验结果进行解释。