血库作业指导书_血库作业指导书sop
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血库工作制度
1.输血科（血库）工作人员必须遵守劳动纪律，坚守工作岗位，如有特殊情况需暂时离开，必须向有关人员交接，说明去向、事由、时间并按时返回，杜绝脱岗现象。
2.一般输血应预先填写血型申请单测定血型，需输血时再填写输血申请单，各申请单均应由医生逐项填写清楚（包括已测知的血型）。急诊输血亦应同时将血型申请单及输血申请一并送血库，否则应拒收并立即通知有关医生补齐。
3.血库人员在收到申请单及血样后，应认真核对申请单上的病人姓名、性别、年龄、住院号、病区、床号及临床诊断，并与血样标签核对是否完全相符，如血样所贴标签与申请单内容不符，应立即退回重送，经核实无误后方可进行血型及配血交叉试验。
4.血库人员应严格按操作规范操作，如确遇难以判断的结果，应向科室负责人或有关上级医生报告，并认真复查，直至结果明确无误，方可发血以确保安全。
5.如发现采供血机构所发血液的血型标记有误，或标签内容模糊不清，应作好记录，然后通知采供血机构退回复核，并应即时向科室负责人及医务科报告。
6.病员血型确定后，原则上应配发同型血。如急症输血，又一时无同型血，可酌情发给O型红细胞，最好是Rh阴性血。紧急发血时，血袋上应标明未完成配血试验，同时，应尽快完成配血试验，如发现配血不合，应立即通知临床医生停止输血。
7.备用血液的申请，须按“输血申请和审批制度”严格执行。
8.血液一经领出，原则上不得退回。如有特殊原因，且出库时间未超过半小时，血液保存完好，经输血科（血库）检查合格后方可酌情退血。
交叉配血（凝聚胺法）
1.原理
凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。2.标本采集：
2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。6.试剂：
6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2 试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。6.3 试剂组成：
试剂1.低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。
试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。试剂4.8.5％生理盐水。7.仪器：
7.1 血型血清索离心机：XTL-4.7
上海离心机械研究所 7.2 离心机：上海手术器械厂
7.3 电热恒温水箱：北京长源实验设备厂 7.4 显微镜：OLYMPUS(日本)8.操作步骤及结果判断：
8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。
8.3 1000g(3000rpm)，离心18秒，弃上清液，管底保留约2滴液体。轻摇 试管，观察是否形成凝块。如未形成凝块，则重做前面试验。8.4 加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。
8.5 凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合;反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。
9.操作性能： 快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。10.超出范围结果处理：
10.1 细胞自凝： 在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
10.2 若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
10.3 红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。
10.4 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11.方法局限性：
11.1 试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
11.2 操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
11.3 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别。
ABO血型鉴定（生理盐水法）
1.原理
根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。2.标本采集
2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。2.2 标本要求：
2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有 冻疮，则主张采耳垂血。
3.标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃ 保存不超过48小时。4.标本运输：室温运输
5.标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定 6.试剂
6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂
6.2 试剂生产厂家：南京华欣药业生物工程有限公司 6.3 试剂组成试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。
试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。
试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。
红细胞悬液的配制
悬液浓度（％）5 10 20
压积红细胞（滴）1 1 1
盐水（滴）2ml（40）0.8ml（16）0.4ml（8）0.2ml（4）
为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。7.操作步骤 7.1 玻片法
7.1.1 取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡 笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分别取等体积待检血样（5％-10％红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。
7.1.2 另取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。
7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻 片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。7.2 试管法
7.2.1 取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。7.2.2 另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和
O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。
7.2.3 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻 摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。8.结果判断
8.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。8.2 凝集强度判断标准：
4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3＋＝红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2＋＝红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1＋＝肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF＝混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。
－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。8.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型
ABO血型正反定型结果
分型血清＋受检者红细胞 抗－A ＋ — — ＋ 抗－B — ＋ — ＋
抗－A＋
B ＋ ＋ — ＋
受检者 血型 A B O AB
受检者血清＋试剂红细胞 A细胞 — ＋ ＋ —
B细胞 ＋ — ＋ —
O细胞 — — — —
9.临床意义：输血、器官移植与亲子鉴定
10.操作性能：快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。11 超出范围结果处理
11.1 红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的 生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。11.2 正反定型结果不一致原因
11.2.1 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可 将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
11.2.2 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例则不适当，使反应不明 显，误判为阴性反应。
11.2.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及B类或cisAB等。
11.2.4 受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
11.2.5 受检者血清中缺乏应有的抗—A和抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。11.2.6 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可 溶性血型物质中和了相应的抗体。
11.2.7 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型 不符的原因。
11.2.8 血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。11.2.9 老年人血清中抗体水平大幅度下降。11.3 正反定型结果不一致的解决方法：
11.3.1 另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞 错样本造成的不符合。
11.3.2 将红细胞洗涤数次，配成2％盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—AI，抗—A＋B及抗—H做试验可以得到其它有用的信息。
11.3.3 对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细 胞已被抗体致敏。
11.3.4 用A1、A2、B、O红细胞从自身红细胞检查受检血清。如果 怀疑是抗—I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。
11.3.5 如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4℃放置30min，用显微镜检查核实。
11.3.6 如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗 —B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80％HAB分泌型的人有用。
11.3.7 如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合。往 往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
11.3.8 如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别： 11.3.8.1 观察细胞与抗—A及抗B的凝集强度，与抗A的反应要比抗 —B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。
11.3.8.2 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集 自身红细胞上的类B抗原。
11.3.8.3 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物 质而无B物质。
11.3.8.4 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰 阴件杆菌感染有关。
12.方法局限性
12.1 分型血清质量性能符合要求，用毕后，应放置冰箱保存，以免细菌污染。12.2 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
12.3 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
12.4 按理IgM抗—A和抗—B与相应红细胞的反应温度以4℃为最
强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般仍在室温（20℃-24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。
12.5 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性 或假阴性结果。
12.6 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
12.7 判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。12.8 试剂一旦发现浑浊不得使用。12.9 制红细胞悬液时防止自凝现象。13.参考文献
中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997，89-92
ABO正定型和Rh血型鉴定（微柱凝胶检测法）
1.原理
ABO血型系统的红细胞遗传表型是根据每个人红细胞上是否存在A和/或B抗原以及血清中相应的抗体来决定的，将人分为四种血型：A型、B型、AB型和O型。红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B，红细胞上有B抗原的B型血清中有抗A，红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗A和抗B，红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。
Rh血型系统的鉴定是根据是否存在D抗原来决定的。
微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（葡聚糖）的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。2.标本采集
2.1 标本种类：新抽取的抗凝血 2.2 标本要求：
2.2.1 抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝
2.2.2 采血量：至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意于抗凝剂混匀）2.2.3 离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟 3.标本储存：待测标本在2-8℃下的保存时间为48小时 4.标本运输：室温保存
5.标本拒收标准：不可使用溶血或受污染，或者含有凝块的样品。6.试剂
6.1 试剂名称：DianaGel Confirm凝胶卡、DianaSol 1号试剂 6.2 试剂生产厂家：Diagnostic Grifols,S.A.（西班牙）6.3 试剂说明：每张DianaGel Confirm凝胶卡由8个微孔管组成（A-B-D-Ctrl-A-B-D-Ctrl），微孔管内含缓冲液浸泡的微粒筛，加上不同的试剂，试剂为：A：单克隆抗－A（克隆16243 G2+16247 E6），B：单克隆抗
－B（克隆9621 A8-），D：单克隆抗-D（克隆P3×290+P3×35+P3×61+P3×21223 B10），质控孔（Ctrl）:无抗体的胶溶液微孔管做质控。7.操作步骤
7.1 将样品、DianaSol 1号试剂和DianaGel Confirm凝胶卡达到室温； 7.2 将新DianaGel Confirm凝胶卡离心；
7.3 红细胞悬液的制备： 用Diana 1号试剂来配制2-3％的血红细胞 稀释液（25μl压积极红细胞加入1ml的Diana 1号试剂中）；
7.4 在相应的微孔（1-6微管）中分别加入25μl的2-3％的红细胞悬液； 7.5 在DianaFuge离心机中离心9min； 7.6 判读结果。8.结果判断模式
9.临床意义：ABO、Rh血型鉴定不合出现溶血性输血反应。10.操作性能
10.1 为国际安全输血检查的推荐方法； 10.2 操作简便方便；
10.3 可节省样品红细胞和血浆； 10.4 灵敏度高、特异性高、重复度好； 10.5 客观性好，避免主观判读结果的影响； 10.6 检测结果可较长时间保存； 10.7 操作者更少接触血液标本。11.超出范围结果处理
11.1 红细胞自凝：冷凝集素增高是最为常见的原因。用37-40℃生理 盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷凝集素，可获得可靠的正定型。
11.2 正反定型结果不一致原因
11.2.1 自身免疫性溶血性贫血引起的红细胞被自身抗体包被； 11.2.2 红细胞A或B抗原的弱化； 11.2.3 红细胞悬液浓度过浓或过淡； 11.2.4 红细胞抗原位点过少或抗原性减弱；
11.2.5 病人感染细菌或病毒后，细菌或病毒产生的酶使红细胞上掩蔽 的T抗原暴露激活，由于正常人血浆中都含有抗T抗体，因此可于正常人血浆中产生凝集反应，正定型实验假阳性；
11.2.6 严重感染的病人，其血浆中白细胞过多，堵塞凝胶筛间隙，影 响红细胞的沉降，引起假阳性。方法局限性：
12.1 变质的或受到细菌等物污染的样品，试剂可能会带来错误的阴或阳性结果；
12.2 因为储运不当的原因，有时会发现在微管的顶部存有小水珠或 在胶泡，在使用类似的凝胶卡前先离心，消除这类问题，如果无法消除，请弃之不用；
12.3 如果发现有管内胶量不足或干裂，请不要用之；
12.4 如果所用的红血球的悬液浓度与建议使用的浓度不符，可能会 引起错误结果；
12.5 使用非原厂的稀释液来配制红血球悬液可能会导致不良结果； 12.6 质控结果必须似阴性，如果是阳性，检测无效，用生理盐水清 洗红细胞并重新配制悬液重新检测，如果得到阴性质控结果，则可以判读结果；
12.7 为了防止冷凝集现象的干扰，实验在室温25℃中进行。
冰冻血浆解冻箱
1.原理
冰冻血浆解冻箱是由加热箱、解冻槽、循环管路、仪器箱等组成。水在加热箱内被加热至设定温度，由循环泵送入解冻槽，冰冻血浆放在专用的不锈钢解冻夹中，水的流体静力压力包住血浆袋，与冰冻血浆袋进行热交换后再循环入加热箱内加热。循环的水流既能加快冰冻血浆与水的热交换，又能使冰冻血浆快速安全地融解至适合输入人体的温度。由于加热箱与解冻槽分离，加热管及周围的高温水不会破坏血浆的有效成分。2.性能参数：
存水量：32kg
水泵能力：25kg/分钟 控制温度：34℃-37℃
控制精度：±0.5℃ 加热功率：1500W
解冻时间：10-18分钟 最大化浆量：6袋（每袋50-200ml）3.操作规程：
3.1 解冻：将冰冻血浆装入专用塑料袋后再放入解冻专用夹，置解冻 槽内，按“启动”键进行解冻
3.2 当发“嘟---”一长声提示音时，解冻程序结束，“完成”灯亮，循环 泵自动关闭。解冻槽内的水流回加热箱，解冻完成 4.维护保养及注意事项：
4.1 每月对水箱温度进行一次检测校正，其方法为：
4.1.1 按住面板上的“1”档键开机，循环泵随即打开，水箱水上升至解 冻槽内，温度窗口显示即时水温。
4.1.2 用计量准确的水银温度计测量解冻槽内的水温，若温度不一致 可按温度“十·一”键若干次直至两者温度相同。4.1.3 最后按一次“存储”键确认即完成校正。4.2 浆袋破损或水内有污物应及时清洗，方法为：
4.2.1 非解冻状态下，按“清洗”键，机器进入清洗状态。温度显示窗 口显示“清洗”符[Q]，并有“清洗”图案提示。
4.2.2 时间窗口显示清洗遍数2，增加或减少清洗遍数按“清洗”键即 可（范围1-3遍）
4.2.3 清洗完成时，时间窗口显示“End”。
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