葡萄酒中酵母菌的检验规程[全文]_酵母菌检验

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酵母菌的检验规程

1、范围

本标准规定了葡萄酒中酵母菌的检验方法

2、取样

干红第一次倒罐或临灌装前三天，由配制人员取样（750ml，3瓶）送化验室，由化验员对所取样品进行酵母菌菌落总数的检测（甜酒配制后可直接送往化验室）。已经做酵母菌菌落总数检测的半成品葡萄酒在5℃以上放置15天以上的，灌装前必须重新进行酵母菌菌落总数的检测。

3、设备和材料 3.1 冰箱：0℃-4℃ 3.2 恒温培养箱：25℃-28℃ 3.3 250ml三角瓶（10个）3.4 灭菌平皿：直径90mm（20个）3.5 真空泵过滤机

3.6 微孔滤膜（0.45微米）3.7 灭菌镊子 3.8 高压灭菌锅 3.9 接种箱

4、培养基和试剂 4.1孟加拉红培养基 4.1.1成分

蛋白胨 5g

葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g 琼脂 20g 0.3g/L孟加拉红溶液 100ml 蒸馏水 1000ml 氯霉素 0.1g 制法：上述各成分加入水溶解后，再加入孟加拉红溶液，另用少量乙醇溶解氯霉后加入培养基中。

5、准备工作

5.1 孟加拉红培养基的制备

按上述成分配制培养基，配好后混匀分装于10个250ml的三角瓶中，然后放入高压灭菌锅内灭菌（121℃灭菌20分钟），待灭菌完毕，将培养基放入45℃水浴锅内待用。

5.2 无菌室用甲醛消毒，用量为每立方米用3ml甲醛（用电炉子加热熏蒸），打开紫外灯进行灭菌（持续30分钟）

6．操作步骤 6.1.操作前准备

6.1.1将所有参与过滤的仪器、器皿进行彻底消毒。在每次实验之前，将过滤器及过滤片置于高压锅内灭菌。

6.2.实验步骤

6.2.1双手用75%酒精擦洗、消毒：无菌操作台面用75%酒精擦拭。

6.2.2 连接过滤装置，被检瓶酒在开启前，必须用75%酒精仔细擦拭瓶口，于酒精灯上方小心地拔除瓶盖。

6.2.3样品于无菌操作台中用真空泵过滤，过滤后，用经过酒精灯火焰灼烧灭菌的镊子将滤膜取出，酒精灯上方正放在培养皿中，并摆放平整，倒入适量的孟加拉红培养基。

6.2.4按上述方法将过滤后的滤膜分别放入三个培养皿中，并标明日期和试样编号；另取一个空白滤膜同样加入培养基，做空白对照。

6.2.5 待琼脂凝固后，将平板倒置于25℃—28℃培养箱中，培养72小时后观察结果。

7、检验结果 样品Ⅰ 样品Ⅱ 样品Ⅲ 空白滤膜

菌落计数：每750ml样品酵母菌落数≤4为合格，≥4为不合格。

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